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        • 果膠裂解酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        果膠裂解酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-16
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        果膠裂解酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Pectin Lyase(PL)Activity Assay Kit
        別名
        果膠裂解酶試劑盒 果膠裂解酶測試盒
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2645
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,是一種能降解應用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        果膠裂解酶(PL)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號: BC2645

        規(guī)格: 100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體120 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 工作液:將試劑一倒入試劑二于50水浴中溶解(期間可拿出振蕩數(shù)次)。該試劑易長菌,配制完成后可-20℃分裝保存,可保存12周。

        產(chǎn)品說明:

        果膠裂解酶(EC4.2.2.10)是果膠酶的重要組成部分,催化果膠分子鏈的消除裂解。來源比較廣泛,主要來源于微生物,在食品加工工業(yè)中提高果汁產(chǎn)量方面有重要意義,在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面也具有潛在的應用價值。

        果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵,生成在還原端C4C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸,在235nm處有特征吸收峰,測定235nm下吸光度的上升來表示果膠裂解酶的活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品

        紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、恒溫水浴鍋、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2. 細胞、細菌或真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后10000g4℃離心10min,取上清置于冰上待測。(細菌、真菌等難以數(shù)量計算的微生物也可以稱取0.1g 細菌/真菌沉淀來進行前處理)

        3. 培養(yǎng)液:直接測定。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至235nm,蒸餾水調(diào)零。

         

        2、 操作表:

        試劑名稱

        測定管

        空白管

        工作液(μL

        180

        180

        樣本(μL

        20

        -

        蒸餾水(μL

        -

        20

        混勻同時按下計時器,測定10s235nm下的初始值A1,40反應30min再次測定吸光值A2,計算ΔA測定管=A2測定管-A1測定管,ΔA空白管= A2空白管-A1空白管,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管??瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。

        三、果膠裂解酶活性計算

        A、按微量石英比色皿計算:

        1. 按照蛋白濃度計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。

        PL活性(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×Cpr÷T=64.1×ΔA÷Cpr

        2. 按照樣本質(zhì)量計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。

        PL活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×W÷V樣總)÷T= 64.1×ΔA÷W

        1. 按照細菌、真菌貨細胞數(shù)量計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每104個細胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。

        PL活性(U/104 cell= ΔA÷ε×d×V反總×109÷V×N÷V樣總)÷T= 64.1×ΔA÷N

        3. 按照培養(yǎng)液體積計算

        酶活性定義:在40℃,pH5.5條件下,每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個酶活力單位。

        PL活性(U/mL=ΔA÷ε×d×V反總×109÷V÷T= 64.1×ΔA

        ε:不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù),5200 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應總體積,0.0002 LV樣:反應體系中樣本體積,0.02mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應時間,30min;109:換算系數(shù),1mol=109nmol;N:細胞數(shù)量,以萬計。

        B、按96UV板計算:

        將上述公式中的d-1cm修改為d-0.6cm96孔板光徑)進行計算即可。

        注意事項:

        1、 A1測定管大于1.5或者ΔA大于0.5,將樣本粗酶液用蒸餾水稀釋后再進行測定。

        2、 建議一次測定不要測定過多樣本以免耽誤過多的酶促反應時間。

        3、 空白管正常情況下變化不超過0.02。

        實驗實例:

        1、 0.1g香蕉皮加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000g ,4℃離心10min,取上清,置冰上待測。之后按照測

        定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管= A2測定管-A1測定管=0.528-0.5254=0.0026,ΔA=

        ΔA測定管-ΔA空白管=0.1551-0.1542=0.0009按樣本質(zhì)量計算酶活得

        PL活性(U/g 質(zhì)量)= 64.1×ΔA÷W=1.090 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g大腸桿菌沉淀加入1mL提取液冰浴超聲波破碎細胞,然后10000g,4℃離心10min,取上清置于冰上,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管= A2測定管-A1測定管=1.2213-0.8277=0.3936,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.1551-0.1542=0.0009,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:

        3、 PL活性(U/g 質(zhì)量)= 64.1×ΔA÷W=251.721 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC2630/BC2635 果膠酶活性檢測試劑盒

        BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒

        BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠(ISP)含量檢測試劑盒

        BC2660/BC2665 多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性檢測試劑盒

        果膠裂解酶活性檢測試劑盒 微量法 果膠裂解酶活性檢測試劑盒 微量法

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