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        • 糖化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        糖化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        糖化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Glucoamylase Assay Kit
        別名
        糖化酶試劑盒 糖化酶測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2675
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測(cè)定意義:糖化酶,即葡萄糖淀*酶(EC3.2.1.3),又稱γ-淀*酶,是一種外應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        糖化酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC2675

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體70 mL×2

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑二

        液體18 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前取1瓶加入10 mL提取液,充分混勻后沸水浴直至溶解(約10min),2-8保存4周; 

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg無(wú)水葡*糖,臨用前加1 mL提取液溶解為10 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品備用,2-8保存兩周; 

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        糖化酶,即葡萄糖淀*酶(EC3.2.1.3),又稱γ-淀*酶。糖化酶是由一系列微生物分泌的,具有外切酶活性的胞外酶,主要作用是從淀粉、糊精、糖原等碳鏈上的非還原性末端依次水解α-1,4糖苷鍵,切下一個(gè)個(gè)葡萄糖單元,對(duì)于支鏈淀粉,當(dāng)遇到分支點(diǎn)時(shí),它也可以水解α-1,6糖苷鍵由此將支鏈淀粉全部水解成葡萄糖。多應(yīng)用于酒精、白酒、抗生素、氨基酸、有機(jī)酸,甘油,淀粉糖等工業(yè)中,是我國(guó)重要的工業(yè)酶制劑之一。

        糖化酶將可溶性淀粉生成葡萄糖,堿性條件下,葡萄糖與3,5-二硝基水楊酸共熱后生成紅棕色化合物,在540nm處有最大光吸收,在一定范圍內(nèi)葡萄糖的量與反應(yīng)液顏色深淺成正比,以此測(cè)定糖化酶的活力。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀 、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、研缽/勻漿器,超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        2. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后4℃,10000g離心10min,取上清

         

        置于冰上待測(cè)。

        3. 培養(yǎng)液或其它液體:直接檢測(cè)。(若有沉淀則離心后測(cè)定)

        二、測(cè)定步驟

        1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至21.5、1.00.8、0.4、0.2、0.1mg/mL。

        序號(hào)

        稀釋前濃度(mg/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(mg/mL

        1

        10

        200

        800

        2.0

        2

        2.0

        150

        50

        1.5

        3

        2.0

        300

        300

        1.0

        4

        1.0

        320

        80

        0.8

        5

        0.8

        200

        200

        0.4

        6

        0.4

        200

        200

        0.2

        7

        0.2

        200

        200

        0.1

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需15µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3. 吸取50μL樣本于1.5mLEP管中沸水浴5min作為對(duì)照管的滅活樣本。

        4. 加樣表:

        試劑(μL

        對(duì)照管

        測(cè)定管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        滅活樣本

        15

        -

        -

        -

        樣本

        -

        15

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        15

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        -

        15

        試劑一

        150

        150

        150

        150

        充分混勻,40℃反應(yīng)20min后沸水浴5min,常溫10000g離心10min。

        上清液

        100

        100

        100

        100

        試劑二

        100

        100

        100

        100

        混勻,沸水浴5min,流水冷卻后,測(cè)定540nm處吸光值A,計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做1-2次。

        三、糖化酶活性計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(xmg/mL)和吸光度ΔA標(biāo)(y,ΔA標(biāo)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測(cè)(yΔA測(cè))帶入公式計(jì)算樣本濃度(x,mg/mL)。

        2. 酶活性計(jì)算:

        1)按照蛋白濃度計(jì)算:

        酶活性定義:在40℃每毫克蛋白每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

        糖化酶活性(U/mg prot=x×V樣總÷V樣總×Cpr÷T=3x÷Cpr

        2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活性定義:在40℃每克組織每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

        糖化酶活性(U/g 質(zhì)量)= x×V樣總÷ W÷T=3x÷W

        3)按照液體體積計(jì)算

        酶活性定義:在40℃每毫升液體每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

        糖化酶活性(U/mL= x×V÷V÷T=3x

        4)按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        酶活性定義:在40℃104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)產(chǎn)生1mg葡萄糖所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

        糖化酶活性(U/104 cell= x×V樣總÷500÷T=0.006x

        V樣:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,15μL=0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,需自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,20min=0.333h;500:細(xì)胞數(shù)量,500萬(wàn)。

        注意事項(xiàng):

        測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),若吸光值較高,請(qǐng)將樣本用提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g玉蘭葉片加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃,10000g離心10min,取上清置于冰上,之后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.501-0.396=0.105,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.488x-0.003計(jì)算x=0.221,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        糖化酶活性(U/g 質(zhì)量)=3x÷W=6.64 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g肝臟加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃10000g離心10min,取上清置于冰上,之后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管=1.006-0.858=0.148,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.488x-0.003,計(jì)算x=0.309,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        糖化酶活性(U/g 質(zhì)量)=3x÷W=9.27 U/g 質(zhì)量。

        3、 取兔血清按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)=A測(cè)定管-A對(duì)照管=1.045-0.481=0.564,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.488x-0.003,計(jì)算x=1.162,按照液體體積計(jì)算:

        糖化酶活性(U/mL=3x=3.486 U/mL

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1850/BC1855 可溶性淀粉合成酶(SSS)活性檢測(cè)試劑盒

        BC1860/BC1865 淀粉分支酶(SBE)活性檢測(cè)試劑盒

        BC4250/BC4255 淀粉脫分支酶(DBE)活性檢測(cè)試劑盒

        BC4260/BC4265 直鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒

         

        糖化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 糖化酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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