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        • 蔗糖合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        蔗糖合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        蔗糖合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Sucrose Synthetase (SS, Cleavage Direction) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC4315
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途蔗糖合成酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        蔗糖合成酶(分解方向;SS-I)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

        微量法

        貨號(hào): BC4315

        規(guī)格: 100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體8 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體8 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入2.5 mL試劑一充分溶解待用,用不完的試劑建議分裝后,-20℃保存,避免反復(fù)凍融;

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:20 mg果糖,臨用前加入1 mL蒸餾水溶解,配成20 mg/mL果糖溶液備用,2-8℃保存一周。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SS)是植物糖代謝過(guò)程的關(guān)鍵酶,負(fù)責(zé)催化蔗糖分解與合成的可逆反應(yīng),其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖, 參與淀粉、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑。

        分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖與UDPG,果糖與3,5 –二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),通過(guò)測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得SS-I活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式低溫離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        組織:按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,8000g,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 20mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為8、65、4、3、21mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3、 操作表 (1.5mL離心管中操作) 

        試劑名稱(µL

        對(duì)照管

        測(cè)定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        10

        10

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        10

        -

         

        蒸餾水

        -

        -

        -

        10

        試劑一

        40


        40

        40

        試劑二

        -

        40

        -

        -

        混勻,30℃水浴30 min后,95℃水浴10 min(蓋緊,防止水分散失)。


        試劑三

        50

        50

        50

        50

        混勻,95℃水浴5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻至室溫。

        蒸餾水

        400

        400

        400

        400

        混勻,取200µL置于微量玻璃比色皿或96孔板中,測(cè)定540nm處吸光值A,分別記為A對(duì)照管,A測(cè)定管,A標(biāo)準(zhǔn)管,A空白管。計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管(標(biāo)準(zhǔn)曲線只需檢測(cè)1-2次)。

        三、SS-I活性計(jì)算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將ΔA帶入方程得到xmg/mL)。

        2、 SS-I活性的計(jì)算:

        1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:每mg蛋白每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個(gè)酶活力單位。

        SS- I酶活(U/mg prot=x×V提取÷V提取×Cpr×103÷T=33.33x÷Cpr。

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:每g樣本每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個(gè)酶活力單位。

        SS- I酶活(U/g質(zhì)量)=x×V提取×103÷W÷T=33.33x÷W。

        V提取:提取液體積,1mL103:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mg=103µgCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測(cè)定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間:30min

        注意事項(xiàng):

        1. 當(dāng)AΔA超過(guò)1.5時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2. 95℃水浴時(shí)EP管蓋緊,防止水分散失,待冷卻至室溫后(建議每次實(shí)驗(yàn)后冷卻時(shí)間保持一致),再進(jìn)行下一步操作,避免液體飛濺燙傷以及影響試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1g黑麥草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得A對(duì)照管=0.111,A測(cè)定管=0.408,標(biāo)準(zhǔn)曲線y =0.1231x-0.0365,A空白管=0.050,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管=0.408-0.111=0.297,x= (0.297+0.0365) ÷0.1231=2.7092,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        SS-I酶活(U/g質(zhì)量)=33.33x÷W=33.33×2.7092÷0.1= 902.976 U/g質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0580/BC0585 蔗糖合成酶(SS)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0600/BC0605 蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0570/BC0575 中性轉(zhuǎn)化酶(NI)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2460/BC2465 植物蔗糖含量檢測(cè)試劑盒

        蔗糖合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 蔗糖合成酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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