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        • 細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測試劑盒 蔗糖
        產(chǎn)品名稱:

        細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測試劑盒 蔗糖

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-16
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測試劑盒 蔗糖
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Solid-Acid Invertase (CWI) Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4320
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶(CWI)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號BC4320

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體50 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體35 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入25 mL試劑一,充分溶解后待用;

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10 mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,配成10 mg/mL葡萄糖溶液備用,2-8℃保存一周。

        產(chǎn)品說明:

        蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase,Inv)不可逆的催化蔗糖裂解形成葡萄糖和果糖,在植物蔗糖代謝中發(fā)揮著重要作用。Inv根據(jù)最適pH,可分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI)和中性轉(zhuǎn)化酶(NI),其中AI根據(jù)亞細胞定位的差異又可分為可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶(Soluble acid InvertaseSAI)和細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶(Cell wall-bound acid Invertase,CWI)。 CWI以離子鍵的形式結(jié)合在細胞壁上,在"組織韌皮部蔗糖卸載、蔗糖質(zhì)外運輸、植物的生長發(fā)育以及抵抗各種脅迫中起著重要作用。

        CWI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,還原糖與3,5 –二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),通過測定540nm處吸光值變化可計算得CWI活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計、臺式低溫離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

        組織:按照質(zhì)量(g: 提取液一體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液,冰浴勻漿后于4℃12000g,離心10min,棄上清,留沉淀;沉淀中加入1mL蒸餾水,充分震蕩混勻,4℃,12000g,離心10min,棄上清,留沉淀;沉淀中加入1mL提取液二,充分混勻,4℃浸提15 h,4℃,12000g,離心10min,取上清置于冰上待測。

         

         

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3、 操作表 (2mL離心管中操作) 

        試劑名稱(µL

        對照管

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        200

        200

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        200

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        200

        試劑一

        800


        800

        800

        試劑二

        -

        800

        -

        -

        混勻,37℃水浴30min后,95℃水浴10 min(蓋緊,防止水分散失)。

        -

        試劑三

        500

        500

        500

        500

        混勻,95℃水浴5 min(蓋緊,防止水分散失),冷卻至室溫。

        混勻,取1000 µL置于1 mL玻璃比色皿中,測定540nm處吸光值A,分別記為A對照管,A測定管,A標(biāo)準(zhǔn)管,A空白管。計算ΔA=A測定管-A對照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管(標(biāo)準(zhǔn)曲線只需檢測1-2)。

        注意:如果樣本在37℃反應(yīng)后的95℃水浴步驟中出現(xiàn)沉淀,建議室溫12000g,離心5min,取上清(若上清不足1000µL,可按比例縮小加樣體系,如800µL上清+400µL試劑三)進行下一步操作。

        三、CWI活性計算

        1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        以各個標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸,其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b,將ΔA帶入方程得到xmg/mL)。

        2、 CWI活性的計算:

        1)按樣本蛋白濃度計算

        酶活定義:37℃mg蛋白每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg還原糖為1個酶活力單位。

        CWI酶活(U/mg prot= x×V提取÷V提取×Cpr×103÷T = 33.33x÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:37℃g樣本每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg還原糖為1個酶活力單位。

        CWI酶活(U/g質(zhì)量)= x×V提取×103÷W÷T = 33.33x÷W

        V提取:提取液體積,1mL103:單位換算系數(shù),1mg=103µgCpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,30min

        注意事項:

        1. 當(dāng)AΔA超過1時,建議將樣本用提取液二稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2. 95℃水浴時EP管蓋緊,防止水分散失,待冷卻至室溫后(建議每次實驗后冷卻時間保持一致),再進行下一步操作,避免液體飛濺燙傷以及影響試驗數(shù)據(jù)。

         

        實驗實例:

        1. 0.1g丁香葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,最后取上清后按照操作步驟操作,測A對照管=0.566A測定管=0.903,標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.315x-0.2723,A空白管=0.058,計算ΔA=A測定管-A對照管=0.903-0.566=0.337x=0.337+0.2723÷1.315=0.463,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        CWI酶活(U/g質(zhì)量)= 33.33x÷W= 33.33×0.463÷0.1=154.433 U/g質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0570/BC0575 中性轉(zhuǎn)化酶(NI)活性檢測試劑盒

        BC2460/BC2465 植物蔗糖含量檢測試劑盒

        BC4310/BC4315 蔗糖合成酶(分解方向SS-I)活性檢測試劑盒

         

        細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測試劑盒 蔗糖 細胞壁結(jié)合酸性轉(zhuǎn)化酶活性檢測試劑盒 蔗糖

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