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        • 亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-16
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Hephaestin(HP) Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4345
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途亞鐵氧化酶(HP)活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC4345

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、試劑三:臨用前加入6 mL蒸餾水溶解備用,用不完的試劑2-8℃保存4周。

        2、標準品:9 µmol/mL的亞鐵離子標準液。

        產(chǎn)品說明:

        亞鐵氧化酶(HsphasetinHP)是銅藍蛋白的同系物,催化亞鐵離子(Fe2+)氧化為三價鐵離子(Fe3+),從而三價鐵與轉鐵蛋白結合,參與細胞鐵釋放。

        以一定濃度的Fe2+ 為底物,在亞鐵氧化酶的催化作用下Fe2+ 被氧化為Fe3+Fe2+ 與菲咯嗪形成有色復合物,在562 nm處有特征吸收峰,先計算出未被氧化的Fe2+ 的含量,進而得出被氧化的Fe2+ 的含量,可通過Fe2+被氧化的速率來反映亞鐵氧化酶活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照質(zhì)量(g蒸餾水體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1 g,加入1 mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于10000 rpm4℃離心10 min,取上清置于冰上待測。

        2、血清或血漿:建議用蒸餾水將血清或血漿稀釋2~4倍后直接檢測。若溶液渾濁則離心取上清置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至562 nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2、 標準液的稀釋:9µmol/mL的亞鐵離子標準液用蒸餾水倍比稀釋為360180、9045、22.511.25、5.625 nmol/mL的標準溶液備用。

         

        3、 標準液稀釋可參考下表:

        序號

        稀釋前濃度(nmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(nmol/mL

        1

        9000

        40

        960

        360

        2

        360

        500

        500

        180

        3

        180

        500

        500

        90

        4

        90

        500

        500

        45

        5

        45

        500

        500

        22.5

        6

        22.5

        500

        500

        11.25

        7

        11.25

        500

        500

        5.625

        備注:實驗中每個標準管需40µL標準溶液。

        4、 操作表:1.5 mL離心管(分光光度計)或96孔板中依次加入下列試劑:

        試劑名稱

        對照管

        測定管

        無基質(zhì)管

        空白管

        標準管

        蒸餾水(µL

        -

        -

        8

        8

        8

        樣本(µL

        8

        8

        -

        -

        -

        試劑一(µL

        112

        112

        112

        112

        112

        用移液槍充分吹打混勻

        試劑二(µL

        -

        40

        40

        -

        -

        標準溶液(µL

        -

        -

        -

        -

        40

        蒸餾水(µL

        40

        -

        -

        40

        -

        混勻,37℃水浴鍋或恒溫培養(yǎng)箱中準確反應3 min

        試劑三(µL

        40

        40

        40

        40

        40

        混勻,于微量玻璃比色皿/96孔板中測定562 nm處吸光值A,分別記為A對照管,A測定管、A無基質(zhì)管、A空白管和A標準管。計算ΔA測定=A無基質(zhì)管-A空白管)-A測定管-A對照管),ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管,同一批次無基質(zhì)管、空白管和標準管只需測1-2。

        三、亞鐵氧化酶活性計算

        1、 標準曲線的繪制:

        以各個標準溶液的濃度(nmol/mL)為x軸,其對應的ΔA標準為y軸,繪制標準曲線,得到標準方程y= kx+b,將ΔA測定帶入方程得到樣本濃度(x,nmol/mL)。

        2、 亞鐵氧化酶活性的計算:

        1)按照樣本蛋白濃度計算

        酶活定義:每mg蛋白每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個酶活力單位。

        亞鐵氧化酶酶活(U/mg prot= x×V試劑二÷V×Cpr÷T ×N= 1.667x÷Cpr×N

        2)按照樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:每g樣品每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個酶活力單位。

        亞鐵氧化酶酶活(U/g鮮重)= x×V試劑二÷V×W÷V提?。?/span>÷T×N = 1.667x÷W×N

        3)按液體體積計算

        酶活定義:每mL樣本每分鐘氧化1 nmolFe2+ 定義為1個酶活力單位。

        亞鐵氧化酶酶活(U/mL= x×V試劑二÷V÷T×N = 1.667x×N

        V試劑二:加入的試劑二體積,0.04 mL;V樣:加入的樣本體積,0.008 mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應時間:3 min;N:稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1. A測定低于0.1時,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:

        1、 0.1g結腸,進行樣本處理,按照測定操作步驟,測得計算ΔA測定 =A無基質(zhì)管-A空白管)-A測定管-A對照管)=1.144-0.041-1.114-0.048=0.037,帶入標準曲線y = 0.0031x - 0.0007,計算x=11.710,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:

        亞鐵氧化酶酶活(U/g質(zhì)量)= 1.667×x÷W×N= 1.667×11.710÷0.1=195.161 U/g質(zhì)量。

        2、 取兔血清,按照測定操作步驟,測得計算ΔA測定=A無基質(zhì)管-A空白管)-A測定管-A對照管)=0.577-0.048-1.114-0.048=0.574,帶入標準曲線y = 0.0031x - 0.0007,計算x=184.935,按照液體體積計算酶活得:

        亞鐵氧化酶酶活(U/mL= 1.667×x=1.667×184.935=308.287 U/mL

        相關系列產(chǎn)品:

        BC1300/BC1305 銅藍蛋白(Cp)活性檢測試劑盒

        BC1310/BC1315 總抗氧化能力(T-AOC)檢測試劑盒

        BC4430/BC4435 尿酸酶活性檢測試劑盒

        BC1360/BC1365 尿酸(UA)含量檢測試劑盒

        BC1320/BC1325 羥自由基清除能力檢測試劑盒

         

        亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒 微量法 亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒 微量法

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