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        • Caspase-3活性測定試劑盒 比色法
        • Caspase-3活性測定試劑盒 比色法
        產品名稱:

        Caspase-3活性測定試劑盒 比色法

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2025-04-23
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        Caspase-3活性測定試劑盒 比色法
        單位

        英文名稱
        Caspase-3 Activity Assay Kit
        檢測方法
        比色法 Colorimetric
        規(guī)格
        50T ; 100T ; 20T

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3830
        規(guī)格20T/50T/100T供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途Caspase-3活性測定應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合


        Caspase-3活性檢測試劑盒說明書
        比色法
        貨號:BC3830
        規(guī)格:20T、50T100T
        產品組成使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱/規(guī)格  20T 50T100T保存條件
        試劑一液體20 mL×1瓶液體20 mL×1瓶液體25 mL×1瓶-20℃保存
        試劑二液體30 mL×1瓶液體60 mL×1瓶液體120 mL×1瓶-20℃保存
        試劑三液體0.25 mL×1支液體0.55 mL×1支液體0.55 mL×2支-20℃保存
        標準品液體1mL×1支液體1 mL×1支液體1 mL×1支-20℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:分裝-20℃保存。

        2. 試劑二:分裝-20℃保存。

        3. 標準品:pNA標準溶液,5 mmol/L。標準溶液在4℃條件下為渾濁狀態(tài),溶解即可變?yōu)槌吻鍫顟B(tài)不影響使用。

        4. 標準品稀釋液配制:取9 mL試劑一加入1 mL試劑二,充分混勻待用。(也可按照試劑一試劑二=9:1的比例,自行配制)。

        產品說明:
        Caspase是參與細胞凋亡過程的蛋白酶家族,包含10多個成員。Caspase-3是凋亡過程中最主要的終末蛋白酶,也是研究最多caspase;它激活pro-caspase-2,6,7,9特異水解多種關鍵凋亡蛋白如 PARP,介導染色質固縮、凋亡小體生成、核 DNA 斷裂。測定原理基于Caspase-3 特異水解多肽底物 DEVD-pNA (Asp-Glu-Val-Asp-p-nitroanilide),釋放的游離硝 基苯胺 pNA405 nm有最大吸收峰。采用可見光光度比色法測定 pNA 而得到 Caspase活性。適用于檢測哺乳動物組織、細胞Caspase-3活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標儀、100μL玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液器、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)
        1、培養(yǎng)細胞:先收集細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數(shù)量(約106個)加100 μL試劑二(若裂解不充分可提高至150-200 μL),震蕩重懸沉淀,置冰上靜置15 min,4℃15000g離心10-15min,取上清置冰上待測。

        2、組織:按照組織質量(g):試劑二體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL試劑二),冰浴研磨或充分剪碎,置冰上靜置15 min,4℃15000g離心10-15min,取上清置冰上待測。  
        二、測定步驟

        1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至405nm,蒸餾水調零。

        2. 臨用前用標準品稀釋液將5 mmol/L pNA標準品稀釋至200、100、50、2512.5、0 μmol/L的標準溶液待用。

        3. 樣本測定(在96孔板/EP中按順序加入以下試劑)

        試劑名稱(μL測定管空白管標準管
        試劑一4040
        樣本50

        試劑二
        50
        試劑三1010
        標準溶液

        100
        混勻,蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37℃孵育60-120分鐘。發(fā)現(xiàn)顏色變化比較明顯時即可測定405nm處吸光值。如果顏色變化不明顯,可以適當延長孵育時間,甚至可以孵育過夜。空白管只需做1-2次。計算ΔA測定=A測定管-A空白管。立即測定405nm下吸光度

        三、Caspase-3活性計算
        1. 標準曲線的建立:
        根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/L)和ΔA標準(y,減去濃度為0的空白管)做標準方程。ΔA測定代入標準方程得到xμmol/L)。
        2. 按酶活性增加百分比計算
        Caspase-3活性增加百分比=實驗處理組A測定-A空白管)/實驗對照組A測定-A空白管)×100%
        該方法簡單可靠,可粗略反應酶活性情況。
        3. 按酶活計算
        參考Chemicon公司的caspase酶活力單位的定義:One unit is the amount of enzyme that will cleave 1.0 nmol of the colorimetric pNA-substrate per hour at 37℃ under saturated substrate concentrations。即一個酶活力單位定義為當?shù)孜镲柡蜁r,在37℃一個小時內可以剪切1nmol pNA底物產生1nmol游離 pNA的酶量。這樣就可以計算出樣品中含有多少個酶活力單位的caspase酶活性。
        Caspase-3活性(U/mg prot=x×V反總÷V×Cpr÷T×103=2x÷Cpr÷T
        V反總:反應體系總體積,0.1mL=10-4L;V:加入樣本體積,0.05mL;T:反應時間,h;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;103:單位換算系數(shù),1μmol =103nmol。
        注意事項:
        1、由于試劑中含有還原劑(DTT),建議將樣品用水稀釋2倍后,用Bradford法測定蛋白濃度,以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。不建議使用BCA法測定蛋白濃度。
        2、Caspase活性測定值低最常見的原因是細胞未發(fā)生凋亡或細胞量太少,其次是觀測時間不恰當。誘導凋亡時,并非劑量越大時間越長Caspase活性就越高。建議設置不同劑量和時間點如0、2、48、16、24小時,以檢測最佳的觀察點。



        3、所測樣本的值高于標準曲線上,可用試劑二稀釋樣本后重新測定。
        4、蓋緊96孔板蓋子并用封口膜密封。37 oC孵育,肉眼可見顏色變黃時的OD405值約為0.2,此時即可測定。顏色變化不明顯可延長反應或過夜,但酶活性較強時,孵育時間過長將導致反應失去線性關系。
        相關發(fā)表文獻:
        [1] Wang B , Wang K , Jin T , et al. NCK1-AS1 enhances glioma cell proliferation, radioresistance and chemoresistance via miR-22-3p/IGF1R ceRNA pathway[J]. Biomedicine & Pharmacotherapy, 2020, 129:110395.
        [2] Wang Z , Xu J H , Mou J J , et al. Novel ultrastructural findings on cardiac mitochondria of huddling Brandt's voles in mild cold environment[J]. Comparative Biochemistry and Physiology - Part A Molecular & Integrative Physiology, 2020, 249:110766.
        [3] Wang Z , Xu J H , Mou J J , et al. Novel ultrastructural findings on cardiac mitochondria of huddling Brandt's voles in mild cold environment[J]. Comparative Biochemistry and Physiology - Part A Molecular & Integrative Physiology, 2020, 249:110766.
        參考文獻:

        1. Cohen GM. Caspases: the executioners of apoptosis. Biochem J, 1997, 326: 1-16.

        2. Janicke R U, Sprengart M L, Wati M R, et al. Emerging role of caspase-3 in apoptosis[J]. Cell Death and Differentiation, 1999, 6:99-104.

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        BC3850  Caspase-5活性檢測試劑盒
        BC3860  Caspase-6活性檢測試劑盒
        BC3880  Caspase-8活性檢測試劑盒
        BC3890  Caspase-9活性檢測試劑盒

        Caspase-3活性測定試劑盒 比色法 Caspase-3活性測定試劑盒 比色法

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