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        • 吡咯啉-5-羧酸合成酶活性檢測試劑盒 其它
        產(chǎn)品名稱:

        吡咯啉-5-羧酸合成酶活性檢測試劑盒 其它

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-16
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        吡咯啉-5-羧酸合成酶活性檢測試劑盒 其它
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Δ1-pyrroline-5-carboxylate(P5CS) synthetase Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4420
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途吡咯啉 -5- 羧酸合成酶(P5CS)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        貨號: BC4420

        規(guī)格: 50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.6 mL×1

        -20保存

        試劑

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體6 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        粉劑×2

        -20保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20保存

        溶液的配制:

        1、試劑三:臨用前加入2.5 mL蒸餾水溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用,-20分裝保存,-20保存一周;

        2、試劑四:臨用前每瓶加入3 mL蒸餾水溶解,現(xiàn)配現(xiàn)用,-20分裝保存,-20保存一周。

        產(chǎn)品說明

        在干旱、鹽漬化、重金屬、紫外線等不同的脅迫條件下,均會誘導(dǎo)植物體內(nèi)脯*酸的積累,對植物起到保護(hù)作用。高等植物中,脯*酸的合成有兩條途徑,分別以谷*酸和鳥*酸為前體。谷*酸途徑主要負(fù)責(zé)脅迫條件下脯*酸的積累,而鳥*酸途徑主要在氮充足條件下起作用,與脅迫情況下脯*酸的積累沒有關(guān)系。

        1-吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)是脯*酸的谷*酸合成途徑中的關(guān)鍵酶,P5CS是一個雙功能酶,在NADPHATP作用下,可催化谷*酸磷酸化及谷*酸 γ-半醛還原,通過測定NADPH340 nm處吸光度的變化,可計算出P5CS的活性高低。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1 mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。

        操作步驟:

        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        組織樣本:按質(zhì)量(g提取液體積(mL15~10比例(建議稱取0.1 g樣本,加入1.0 mL提取液一)加入提取液一,再加入10 μL提取液二,冰浴勻漿后于4℃8000 rpm,離心15 min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至340 nm,蒸餾水調(diào)零。  

         

        2、 將試劑三、試劑四置于冰上待測。

        3、 操作表:(在1 mL石英比色皿中操作)

        試劑名稱(μL

        空白管

        測定管

        蒸餾水

        100

        -

        樣本

        -

        100

        試劑一

        600

        600

        試劑二

        100

        100

        試劑三

        100

        100

        試劑四

        100

        100

        1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340 nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37水浴鍋/37℃培養(yǎng)箱放置5min,拿出迅速擦干測定5min 10s時的吸光值A2,計算ΔA測定管= A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。

        注意:空白管只需測定1-2次。

        三、P5CS酶活計算

        1按樣本蛋白濃度計算

        酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

        P5CS酶活U/mg prot=ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(V×Cpr)÷T =321.54×ΔA÷Cpr

        2、按樣本質(zhì)量計算

        酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol NADPH為一個酶活單位。

        P5CS酶活U/g 質(zhì)量= ΔA÷ε÷d×V反總×109÷(W×V÷V樣總)÷T =324.76×ΔA÷W

        εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cmd:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.001L;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;V樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1.01 mLW:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時間,5 min;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。

        注意事項

        1、當(dāng)A1測定高于1.2或者ΔA大于0.5時,建議將樣本稀釋后檢測,并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2盡量使用新鮮樣本進(jìn)行檢測,操作時請置于冰上操作。

        3、ΔA空白管的數(shù)值一般不超過0.05。

        實驗實例:

        1、0.1g三葉草進(jìn)行樣本處理,樣本稀釋2倍,按照測定步驟操作,計算得ΔA測定管= A1測定-A2測定=0.923-0.895=0.028ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.667-0.659=0.008,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.02,按照樣本質(zhì)量計算酶活得:

        P5CS酶活U/g 質(zhì)量=324.76×ΔA÷W×稀釋倍數(shù)=129.9 U/g 質(zhì)量。

        關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0290/BC0295 脯*酸(PRO)含量檢測試劑盒

        BC1580/BC1585 谷*酸(Glu)含量檢測試劑盒

        BC4400/BC4405 鳥*酸轉(zhuǎn)氨酶(δ-OAT)活性檢測試劑盒

        BC0070/BC0075 谷*酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒

        BC1550/BC1555 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活性檢測試劑盒

        吡咯啉-5-羧酸合成酶活性檢測試劑盒 其它 吡咯啉-5-羧酸合成酶活性檢測試劑盒 其它

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