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        • 尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化
        產(chǎn)品名稱:

        尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        中文名稱
        尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Uricase Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4435
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途尿酸酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        尿酸酶活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號BC4435

        規(guī)格100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體4 mL×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體6 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體102 μL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制: 

        1、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入898 µL蒸餾水得到1 mmol/mL的過氧*溶液,2-8℃保存4周。

        2、 工作液A的配制:按照試劑二:試劑三:試劑四 = 0.85mL2.55mL1.7mL5.1mL,30S)的比例配制,用于樣本測定管、空白管及標(biāo)準(zhǔn)管的檢測。根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,配后建議2小時(shí)內(nèi)用完2-8℃或者冰上保存)

        3、 工作液B的配制:按照試劑二:試劑三:試劑一 = 0.85mL2.55mL1.7mL5.1mL30S)的比例配制,用于樣本對照管的檢測。根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,配后建議2小時(shí)內(nèi)用完2-8℃或者冰上保存)

        產(chǎn)品說明:

        尿酸酶,又名尿酸*化酶,是一種參與嘌呤降解途徑的氧化酶,可以將尿酸分解為尿囊酸素進(jìn)而排出體外。尿酸為嘌呤代謝的終末產(chǎn)物,積累過多將導(dǎo)致痛風(fēng)、腎病、心血管疾病等多種疾病的發(fā)生。尿酸酶在尿酸相關(guān)疾病的臨床檢測以及治療中有著重要意義。

        尿酸酶催化尿酸分解為尿*素、CO2H2O2,H2O2氧化亞鐵*中的Fe2+生成Fe3+,Fe3+進(jìn)一步與4-氨基安*比林和酚反應(yīng)生成紅色醌類化合物,在505 nm處有特征吸收峰,通過測定505 nm處的吸光值來反映尿酸酶的活性。 

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰、EP管、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        組織:按照組織質(zhì)量(g)︰提取液體積mL15~10的比例(建議稱取約0.1 g組織,加入1 mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000 rpm,4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

        細(xì)菌或細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)): 提取液體積(mL)為500~1000 : 1的比例(建議500萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞加入1 mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200 W,超聲3 s,間隔7 s,總時(shí)間5 min);然后10000 rpm4℃,離心10 min,取上清置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長至505 nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 1 mmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5 µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:取20μL 1mmol/mL過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)液,加入1980μL蒸餾水,充分混勻,配制成10μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,再取50μL 10μmol/mL過氧化氫標(biāo)準(zhǔn)液,加入950μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配。(實(shí)驗(yàn)中每管需要30μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積)。

        3、 操作表:(1.5 mL離心管/96孔板中)

        試劑名稱(µL

        對照管

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        30

        30

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        30

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        30

        工作液A

        -

        170

        170

        170

        工作液B

        170

        -

        -

        -

        混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30 min。于微量玻璃比色皿/96孔板,測定505nm處吸光值A,分別記為A對照管、A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計(jì)算ΔA測定=A測定管-A對照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管,標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測1-2次。

        三、尿酸酶活性計(jì)算

        1)按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活定義:在pH 8.8的條件下,每克樣本每小時(shí)分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol H2O2定義為一個(gè)酶活力單位。

        尿酸酶酶活(U/g 質(zhì)量)= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V樣本÷W×V樣本÷V提取)÷T

        = ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        2)按蛋白濃度計(jì)算

        酶活定義:在pH 8.8的條件下,每毫克蛋白每小時(shí)分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol H2O2定義為一個(gè)酶活力單位。

        尿酸酶酶活(U/mg prot= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V樣本÷Cpr×V樣本)÷T

        = ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        (3)按照細(xì)菌數(shù)量或細(xì)胞計(jì)算

        酶活定義:在pH8.8的條件下,每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每小時(shí)分解尿酸產(chǎn)生 1 μmol H2O2定義為一個(gè)酶活力單位。

        尿酸酶酶活(U/104 cell= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V樣本÷N×V樣本÷V提?。?/span>÷T

        =ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

        C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.5 µmol/mL;V樣本:加入的樣本體積,0.03 mL;V提?。禾崛∫后w積,1 mL;T:酶促反應(yīng)時(shí)間:0.5 h;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN細(xì)菌數(shù)量(以萬計(jì))。

        注意事項(xiàng):

        1、 A大于1.5時(shí),建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,并在計(jì)算時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

        2、 工作液A與工作液B,需根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,配后建議2小時(shí)內(nèi)用完。工作液本身淡黃的,隨著時(shí)間的延長,會(huì)變?yōu)榧t色,如有變色,則視為失效,需重新配制。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g小鼠肝臟進(jìn)行樣本處理,取上清稀釋4倍后按測定步驟操作,使用96孔板測定計(jì)算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.804-0.285=0.519,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.741-0.051=0.690,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        尿酸酶酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×4(稀釋倍數(shù))= 0.519÷0.690÷0.1×4(稀釋倍數(shù))=30.09 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4070/BC4075  單寧酶活性檢測試劑盒

        BC4080/BC4085  肉桂酸-4-羥化酶(C4H)活性檢測試劑盒

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        尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化 尿酸酶活性檢測試劑盒 抗氧化

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