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        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測(cè)試劑盒-常量法 > 脂肪酸代謝系列 > BC1075-100T/96S丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
        • 丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
        產(chǎn)品名稱:

        丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-16
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        推薦
        若使用96孔板測(cè)定,需使用96孔UV板,推薦貨號(hào)YA0602
        英文名稱
        Pyruvate Decarboxylase(PDC) Activity Assay Kit
        別名
        丙酮酸脫羧酶試劑盒 PDC Kit 丙酮酸脫羧酶(PDC)試劑盒 丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectro

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC1075
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        丙酮酸脫羧酶(PDC)活性檢測(cè)試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC1075

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一A

        液體14 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一B

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑一C

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        試劑二A

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二B

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二C

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 提取液:內(nèi)含不溶物,使用前搖勻。

        2、 試劑一的配制:臨用前配制,將試劑一B、試劑一C加入到試劑一A中并充分溶解。-20分裝保存,可保存1個(gè)月,避免反復(fù)凍融

        3、 試劑二B:臨用前加入0.3mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20分裝保存4,避免反復(fù)凍融。

        4、 試劑二C:臨用前加入1mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20分裝保存4,避免反復(fù)凍融。

        5、 試劑二的配制:臨用前配制,取1.305mL試劑二A、0.12mL試劑二B0.075mL試劑二C混合(共1.5mL,約75T),現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        PDC主要存在于酵母中,是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一,催化丙酮酸脫羧生成乙醛。

        PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛,添加乙醇脫氫酶(ADH)來進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+NADH340nm有吸收峰,而NAD+沒有;通過測(cè)定340nm光吸收下降速率,來計(jì)算PDC活性。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        臺(tái)式離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量石英比色皿/ 96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

         

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、細(xì)胞或細(xì)菌樣本的制備:先收集細(xì)胞或細(xì)菌樣本到離心管內(nèi),棄上清,按照每500萬細(xì)胞或細(xì)菌加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)。16000g4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2、組織樣本:稱取約0.1g組織,加入1mL提取液,冰上充分研磨。16000g,4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。

        3、血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。

        二、操作步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2、 根據(jù)樣本數(shù)取適量試劑一、試劑三37℃提前預(yù)熱30min.

        3、 操作表:(在微量石英比色皿/ 96UV板中按下表順序加入試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        空白管

        試劑一

        100

        100

        試劑三

        60

        60

        試劑二

        20

        20

        樣本

        20

        -

        蒸餾水

        -

        20

        迅速混勻后于340nm比色,記錄10s70s的吸光值,測(cè)定管的記為A1A2,空白管的記為A3A4,計(jì)算ΔA=A1-A2-A3-A4)。(空白管只需做1-2次)

        三、PDC活性計(jì)算

        A.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算:

        1、血清(漿)PDC活力的計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/mL=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=1.61×ΔA

        2、 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/mg prot=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T=1.61×ΔA÷Cpr

        3、 按樣本質(zhì)量計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,g組織質(zhì)量在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/g 質(zhì)量)=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T=1.61×ΔA÷W

        4、 細(xì)菌或細(xì)胞中PDC活力的計(jì)算:

        單位的定義:37℃條件下,1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolNADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/104 Cell= ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×N)÷T =1.61×ΔA÷N

         

         

         

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣本:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mLCpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定;T:反應(yīng)時(shí)間,1min;W:樣本質(zhì)量,gV提?。禾崛∫后w積,1mL;N:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),以萬計(jì)106:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=106μmol。

        B.使用96UV板測(cè)定的計(jì)算:

        1、血清(漿)PDC活力的計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,每毫升血清(漿)在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/mL=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷V樣本÷T=2.68×ΔA

        2、按樣本蛋白濃度計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/mg prot=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本×Cpr)÷T=2.68×ΔA÷Cpr

        3、按樣本質(zhì)量計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,g組織質(zhì)量在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmol NADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/g 質(zhì)量)=ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V樣本)÷T=2.68×ΔA÷W

        4、細(xì)菌或細(xì)胞中PDC活力的計(jì)算:

        單位定義:37℃條件下,1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化1μmolNADH氧化定義為一個(gè)酶活力單位。

        PDCU/104 Cell= ΔA×V反總÷(ε×d)×106÷(V樣本÷V提取×N)÷T =2.68×ΔA÷N

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cmd:比色皿光徑,0.6cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4LV樣本:加入反應(yīng)體系中上清液體積,0.02mL;Cpr:蛋白濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定;T:反應(yīng)時(shí)間,1min;W:樣本質(zhì)量,g;V提取:提取液體積,1mL;N:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),以萬計(jì);106:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=106μmol。

        注意事項(xiàng):

        1、 實(shí)驗(yàn)時(shí),試劑二和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

        2、 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃25℃,可以取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中;或者使用浮漂固定比色皿放入水浴鍋;或者使用恒溫培養(yǎng)箱等。

        3、 最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),一個(gè)人比色,一個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。使用96孔板測(cè)定時(shí)不推薦同時(shí)測(cè)多個(gè)樣本。

        4、 如果1分鐘變化值較小可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間,同時(shí)注意修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g綠蘿葉加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清,之后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A1-A2-A3-A4=0.9557-0.9299-0.7363-0.7301=0.0196,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        PDCU/g 質(zhì)量)=1.6×ΔA÷W=1.6×0.0196÷0.1=0.3136 U/g 質(zhì)量。

         

        2、 0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋40倍后按照測(cè)定步驟操作,用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA=A1-A2-A3-A4=0.703-0.468-0.7363-0.7301=0.2288,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        PDCU/g 質(zhì)量)=1.6×ΔA÷W=1.6×0.2288÷0.1×40(稀釋倍數(shù))=146.432 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        [1] Chong Li,Shi Gao,Xiaotong Li,et al. Efficient metabolic evolution of engineered Yarrowia lipolytica for succinic acid production using a glucose-based medium in an in situ fibrous bioreactor under low-pH condition. Biotechnology for Biofuels. August 2018;(IF5.452)

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0590/BC0595 游離脂肪酸(FFA)含量檢測(cè)試劑盒

        BC2340/BC2345 脂肪酶(LPS)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0320/BC0325 植物中脂氧合酶(LOX)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0750/BC0755 乙醛脫氫酶(ALDH)活性檢測(cè)試劑盒

        丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝 丙酮酸脫羧酶活性檢測(cè)試劑盒 脂肪酸代謝

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