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        • 葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-23
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        中文名稱
        葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        單位

        英文名稱
        Glucose Content Assay kit (o-Toluidine Colorimetry)
        檢測(cè)方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5875
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途葡萄糖含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒(鄰甲苯胺顯色法)說(shuō)明書

        微量法

        貨號(hào):BC5875

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體2.4 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:取3.6mL試劑二、18mL冰乙酸加入試劑一混合,最后工作液為均一澄清液體。溶解好的試劑-20℃分裝避光可以保存8周。(注:若先將試劑一、試劑二混合,則溶液為無(wú)機(jī)相和水相的液體混合物,加入冰乙酸混勻后溶液會(huì)變均一澄清)

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,制備 10 mg/mL 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液待用;用不完的試劑2-8℃保存4周。臨用前取30μL10mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入930μL蒸餾水,配制成0.3125mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        葡萄糖不僅是細(xì)胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過(guò)光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動(dòng)物而言,葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯*能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

        葡萄糖與鄰甲苯胺在強(qiáng)酸溶液中加熱,葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺,后者脫水生成席夫(Schiff)堿,呈現(xiàn)藍(lán)綠色,在630nm處有吸收峰。該試劑盒適合測(cè)定動(dòng)物組織、血清(漿)及細(xì)胞(細(xì)菌)樣本。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)式移液槍、冰乙酸(98% AR)、5%三氯*酸(根據(jù)注意事項(xiàng)確定是否需要自備)、異丙醇(根據(jù)注意事項(xiàng)確定是否需要自備)、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 血清(漿)等液體樣本:直接測(cè)定。若液體有渾濁則離心取上清測(cè)定。

        2. 動(dòng)物組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

         

        3. 細(xì)胞/細(xì)菌:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        二、測(cè)定步驟

        1.可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至630nm,可見分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。

        2.操作表:(在1.5mL EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        50

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        50

        -

        蒸餾水

        -

        -

        50

        試劑一

        200

        200

        200

        渦旋混勻,100℃煮沸15min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫后,取200μL 96孔板中測(cè)定630nm處測(cè)吸光值,分別記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè) 1-2 次。

        三、葡萄糖含量計(jì)算

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        葡萄糖含量(mg/mL= ΔA測(cè)定×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V÷W = 0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        2. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        葡萄糖含量(mg/mg prot= ΔA測(cè)定×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V÷(V×Cpr) =0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        3. 按液體體積計(jì)算

        葡萄糖含量(mg/mL= ΔA測(cè)定×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V÷V= 0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

        4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        葡萄糖含量(mg/104 cell= ΔA測(cè)定×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V÷N= 0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

        C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.3125mg/mL;V提:前處理提取液體積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.05mL; Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLN:細(xì)胞數(shù)量,以萬(wàn)計(jì)。

        注意事項(xiàng):

        1、 試劑一具有腐蝕性,請(qǐng)佩戴好手套口罩,小心操作。

        2、 高血脂樣本若最終反應(yīng)液出現(xiàn)渾濁,在反應(yīng)液中加入550μL的異丙醇,充分混合,可以溶解脂質(zhì),消除渾濁,測(cè)定其吸光值。計(jì)算時(shí)將所測(cè)得吸光度乘以1.5。

        3、 嚴(yán)重黃疸、溶血等血清樣本,需要先制備無(wú)蛋白血濾液(建議100μL樣本加300μL 5%三氯*酸溶液,充分混合,相當(dāng)于將樣本稀釋四倍,3000rpm 4℃離心10min,取上清待測(cè)),再進(jìn)行計(jì)算。注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 50μL人血清樣本,用蒸餾水稀釋5倍,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.450-0.057=0.393,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.708-0.057=0.651,按液體體積計(jì)算得:

        葡萄糖含量(mg/mL=0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×5 =0.943mg/mL。

        2. 0.1g小鼠肌肉組織,按前處理和測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算:ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.168-0.057= 0.111,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.708-0.057=0.651,按液體體積計(jì)算得:

        葡萄糖含量(mg/mL=0.3125×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =0.533mg/mL。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Yee H Y, Goodwin J F. Evaluation of some factors influencing the o-toluidine reaction with glucose[J]. Analytical Chemistry, 2002, 45(13).DOI:10.1021/ac60335a030.

        [2] Dubowski K M. An o-Toluidine Method for Body-Fluid Glucose Determination[J]. Clinical Chemistry, 1962(6) :6.DOI:10.1093/clinchem/8.6.592.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測(cè)試劑盒

        BC0340/BC0345 糖原含量檢測(cè)試劑盒

        BC2490/BC2495 血糖含量檢測(cè)試劑盒

        BC2500/BC2505 葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒

        BC2540/BC2545 纖維素酶(CL)活性檢測(cè)試劑盒

        葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 微量法 葡萄糖含量檢測(cè)試劑盒 微量法

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