植物花色苷含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC1380
規(guī)格：50T/24S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

產品說明：
花色苷是一類可食用的易溶于水等溶劑的天然色素。花色苷使植物呈現(xiàn)多彩的顏色，本身更具有多種保健作用，因而在天然食用色素、保健品和醫(yī)藥行業(yè)都有著廣闊的應用前景。


根據(jù)花色苷在不同pH下的結構性質測定花色苷含量，在pH為1時花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當pH為4.5時，花色苷轉變?yōu)闊o色查爾酮形式在530nm處無吸收峰，通過測定不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值計算樣本中花色苷的含量。
 注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
按照樣本質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g樣本，加入1mL提取液），充分勻漿后轉移到EP管中， 封口膜封口防止揮發(fā)，60℃浸提30min，期間可震蕩數(shù)次，提取后提取液定容至1mL。12000rpm，常溫離心10min，取上清液待測。
二、測定步驟

1. 可見分光光度計預熱30min以上，蒸餾水調零。

2. 加樣表：

充分混勻后測定測定管1和測定管2分別在530nm和700nm處的吸光度，測定管1在530nm和700nm處的吸光值記為A1、A1’，測定管2在530nm和700nm處的吸光值記為A2、A2’，計算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）。

三、花色苷含量計算

1. 按樣本質量計算

花色苷含量（μmol/g 質量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W

1. 按樣本蛋白濃度計算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀釋倍數(shù)，該反應體系下為10；d：比色皿光徑，1cm；W：樣本質量，g；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù)，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提?。禾崛∫嚎傮w積，1mL；10³：單位換算系數(shù)，1mmol=10³μmol；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需用PBS單獨提取后自行測定）。
注意事項：

1. 如果A1大于1，可以適當加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變，如50μL上清液和950μL試劑一（相當于稀釋20倍）；如果A1小于0.1，可以適當縮小稀釋倍數(shù)，保證總體積不變，如500μL上清液和500μL試劑一（相當于稀釋 2 倍），使A1保持在0.1~1范圍內，可提高檢測靈敏度；注意應同樣調整上清液和試劑二體積比例；計算時以實際稀釋倍數(shù)代入計算公式中。

2. 因提取液會使蛋白變性，若使用蛋白濃度計算需用PBS單獨提取后自行測定。

實驗實例：

1. 取0.1g西梅皮加入1mL提取液充分勻漿后轉移到EP管中，封口膜封口防止揮發(fā)，60℃浸提30min，期間可震蕩數(shù)次，提取后提取液定容至1mL，離心取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.249-0.101）-（0.133-0.065）=0.08，按樣本質量計算含量得：花色苷含量（μmol/g質量）=0.037×ΔA× F÷W =0.037×0.08×10÷0.1=0.296 μmol/g 質量。

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