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        • 葡萄糖含量檢測試劑盒 糖代謝
        產品名稱:

        葡萄糖含量檢測試劑盒 糖代謝

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-23
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        葡萄糖含量檢測試劑盒 糖代謝
        單位

        英文名稱
        Glucose Content Assay kit (o-Toluidine Colorimetry)
        檢測方法
        可見分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5870
        規(guī)格50T/48S供貨周期現貨
        主要用途葡萄糖含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        葡萄糖含量檢測試劑盒(鄰甲苯胺顯色法)說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC5870

        規(guī)格:50T/48S

        產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體6 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:9mL試劑二、45mL冰乙酸加入試劑一混合,最后工作液為均一澄清液體。溶解好的試劑-20℃分裝避光可以保存8周。(注:若先將試劑一、試劑二混合,則溶液為無機相和水相的液體混合物,加入冰乙酸混勻后溶液會變均一澄清)

        2、 標準品:臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,制備 10 mg/mL 葡萄糖標準溶液待用;用不完的試劑2-8℃保存4周。臨用前取30μL10mg/mL葡萄糖標準溶液,加入930μL蒸餾水,配制成0.3125mg/mL葡萄糖標準溶液。

        產品說明:

        葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統、肌肉、脂肪組織等的唯*能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。

        葡萄糖與鄰甲苯胺在強酸溶液中加熱,葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺,后者脫水生成席夫(Schiff)堿,呈現藍綠色,在630nm處有吸收峰。該試劑盒適合測定動物組織、血清(漿)及細胞(細菌)樣本。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、可調式移液槍、冰乙酸AR98%、5%三氯*酸(根據注意事項確定是否需要自備)、異丙醇(根據注意事項確定是否需要自備)、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 血清(漿)等液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

        2. 細胞/細菌:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

         

        3. 動物組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。  

        二、測定步驟

        1.可見分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至630nm,冰乙酸調零。

        2.操作表:(在1.5mL EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        標準管

        空白管

        樣本

        100

        -

        -

        標準品

        -

        100

        -

        蒸餾水

        -

        -

        100

        試劑一

        1000

        1000

        1000

        渦旋混勻,100℃煮沸15min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻至室溫后,取1000μL 1mL玻璃比色皿中測定630nm處測吸光值,分別記為A測定、A標準、A空白。計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標準=A標準-A 空白。標準管和空白管只需測 1-2 次。

        三、葡萄糖含量計算

        1. 按樣本質量計算

        葡萄糖含量(mg/mL= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷W = 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷W

        2. 按樣本蛋白濃度計算

        葡萄糖含量(mg/mg prot= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷(V×Cpr) =0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

        3. 按液體體積計算

        葡萄糖含量(mg/mL= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷V= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準

        4. 按細胞數量計算

        葡萄糖含量(mg/104 cell= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷N= 0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷N

        C標:標準管濃度,0.3125mg/mL;V提:前處理提取液體積,1mL;V樣:加入樣本體積,0.1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;N:細胞數量,以萬計。

        注意事項:

        1、 試劑一具有腐蝕性,請佩戴好手套口罩,小心操作。

        2、 高血脂樣本若最終反應液出現渾濁,在反應液中加入550μL的異丙醇,充分混合,可以溶解脂質,消除渾濁,測定其吸光值。計算時將所測得吸光度乘以1.5。

        3、 嚴重黃疸、溶血等血清樣本,需要先制備無蛋白血濾液(建議100μL樣本加300μL 5%三*酸溶液,充分混合,相當于將樣本稀釋四倍,3000rpm 4℃離心10min,取上清待測),再進行計算。注意同步修改計算公式

        實驗實例:

        1. 100μL人血清樣本,用蒸餾水稀釋5倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.277-0=0.277,ΔA標準=A標準-A空白=0.472-0=0.472,按液體體積計算得:

        葡萄糖含量(mg/mL=0.3125×ΔA測定÷ΔA標準×5 =0.917 mg/mL

        2. 0.1g小鼠肌肉組織,按前處理和測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.098-0=0.098,ΔA標準=A標準-A空白=0.472-0=0.472,按液體體積計算得:

        葡萄糖含量(mg/mL=0.3125×ΔA測定÷ΔA標準÷W =0.659 mg/mL

        參考文獻:

        [1] Yee H Y, Goodwin J F. Evaluation of some factors influencing the o-toluidine reaction with glucose[J]. Analytical Chemistry, 2002, 45(13).DOI:10.1021/ac60335a030.

        [2] Dubowski K M. An o-Toluidine Method for Body-Fluid Glucose Determination[J]. Clinical Chemistry, 1962(6) :6.DOI:10.1093/clinchem/8.6.592.

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