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        • 過氧化物酶(POD)生化檢測試劑盒 抗逆系列
        產(chǎn)品名稱:

        過氧化物酶(POD)生化檢測試劑盒 抗逆系列

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-03
        過氧化物酶(POD)生化檢測試劑盒 抗逆系列
        檢測方法可見分光光度法
        POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
        試驗中所需的儀器和試劑:可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC0090
        規(guī)格50管/48樣供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途檢測樣本中的過氧化物酶含量應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒說明書
        可見分光光度法
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
        貨號:BC0090
        規(guī)格:50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體40 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二液體0.04 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑三液體10 mL×1瓶2-8℃保存
        溶液的配制:
        1. 試劑二:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中,使用前需先離心。取0.01 mL試劑二加入3.2mL試劑一混合備用(約24T,現(xiàn)配現(xiàn)用,也可根據(jù)樣本量按比例配制。

        產(chǎn)品說明:
        POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H2O2氧化特定底物,在470nm有特征光吸收。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
        1. 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備:

        細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
        1. 血清(漿)樣本:直接檢測。

        二、測定步驟
        1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至470nm,蒸餾水調(diào)零。
        2、測定前將試劑一、二和三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min。
        3、樣本測定表:
         
        試劑名稱(µL)測定管
        樣本15
        蒸餾水270
        試劑一520
        試劑二130
        試劑三135
        在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm30s時的吸光值A11min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1
        三、POD活性計算
        1. 血清(漿)POD活性

        單位定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
        POD(U/mL=ΔA×V反總÷V÷0.01÷T =7133×ΔA
        1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

        1. 按樣本蛋白濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
        POD(U/mg prot=ΔA×V反總÷V×Cpr÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
        1. 按樣本質(zhì)量計算

        單位定義:每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
        POD(U/g 質(zhì)量)=ΔA×V反總÷(W× V÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
        1. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

        單位定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
        POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
        V反總:反應(yīng)體系總體積,1.07mL;V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,1minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬。
        注意事項:
        1. 若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)放置10min以上,測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。

        2. 如果ΔA小于0.005,可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

        實驗實例:
        取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上,用提取液稀釋2倍后按照測定步驟操作,用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按樣本質(zhì)量計算含量得:
        POD(U/g 質(zhì)量)=7133×ΔA÷W×2(稀釋倍數(shù))=3.132×104 U/g 質(zhì)量。
        取0.1049g黃楊葉片,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上,按照測定步驟操作,用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439按樣本質(zhì)量計算含量得:
        POD(U/g 質(zhì)量)=7133×ΔA÷W=2.985×104 U/g 質(zhì)量


        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
        1. Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.

        2. Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.

        3. Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.

        4. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)

        5. Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

        參考文獻(xiàn):
        [1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
        [2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0190/BC0195  多酚氧化酶(PPO)活性檢測試劑盒
        BC0210/BC0215  苯*解氨酶(PAL)活性檢測試劑盒
        BC0170/BC0175  超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒
        BC0200/BC0205  過氧化氫酶(CAT)活性檢測試劑盒


         

        過氧化物酶(POD)生化檢測試劑盒 抗逆系列  過氧化物酶(POD)生化檢測試劑盒 抗逆系列

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