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        • 高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-23
        單位

        中文名稱
        高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        英文名稱
        Ferric chelate reductase Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5915
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途高鐵螯合物還原酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        高鐵螯合物還原酶(FCR)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號(hào):BC5915

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑一

        液體6 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑二

        液體10 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑三

        液體6 mL×1瓶

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 顯色液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二:試劑三=50μL:50μL50μL150μL1T)的比例配制顯色液,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入0.71mL蒸餾水和10μL濃硫酸,配制成50μmol/mL Fe2+標(biāo)準(zhǔn)液。溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品2-8℃可以保存2周。

        3、 62.5nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:臨用前取50μL 50μmol/mL Fe2+標(biāo)準(zhǔn)液和950μL蒸餾水混合配制成2.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液;再吸取25μL 2.5μmol/mL2500nmol/mL)和975μL蒸餾水混合配制成62.5nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        產(chǎn)品說明:

        雙子葉植物和非禾本科單子葉植物采用鐵螯合還原反應(yīng)的高效活化和吸收機(jī)制從土壤中獲取鐵。三價(jià)鐵還原為二價(jià)鐵后才能被植物吸收利用。在鐵充足時(shí),植物根部的三價(jià)鐵氧化還原酶將Fe(III)-螯合物中的鐵還原并將還原所得Fe2+轉(zhuǎn)運(yùn)通過細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)入根細(xì)胞內(nèi)。高鐵螯合物還原酶(Ferric chelate reductase,FCR,EC1.16.1.7)催化Fe3+還原為Fe2+,F(xiàn)e2+和菲洛嗪形成紫色絡(luò)合物,在562nm下有特征吸收峰。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、濃硫酸(95%-99% AR)、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. 組織樣本:按質(zhì)量(g): 提取液體積(mL1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃,8000g,離心10min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。


        2. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

        二、測定步驟

        1.可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至562nm,可見分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2.顯色液臨用前平衡至常溫。

        3.標(biāo)準(zhǔn)管測定

        吸取50μL 62.5nmol/mL Fe2+標(biāo)準(zhǔn)液,加入150μL顯色劑,充分混勻,測定562nm下的吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn),此時(shí)Fe2+終濃度為15.625nmol/mL,標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。

        4.空白管測定

        吸取50μL蒸餾水,加入150μL顯色劑,充分混勻,測定562nm下的吸光度,記為A空白,計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白,空白管只需做1-2次。

        5.操作表:(在微量玻璃比色皿或96孔板中以下試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        樣本

        50

        顯色液

        150

        立即充分混勻后于微量玻璃比色皿/96孔板,562nm處測定10s時(shí)的吸光值A1,常溫反應(yīng)30min,測定30min10s時(shí)的吸光值A2,記錄562nm10s時(shí)吸光值A130min后的吸光值A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

        三、高鐵螯合物還原酶(FCR)活性計(jì)算

        (1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

        單位的定義:每mg組織蛋白在每mL體系中每分鐘生成1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。

        FCR活性(U/mg prot)= ΔA×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷(Cpr×V) ÷T=2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        (2)按樣本質(zhì)量計(jì)算:

        單位的定義:每g組織在每mL體系中每分鐘生成1nmol Fe2+定義為一個(gè)酶活力單位。

        FCR活性(U/g 質(zhì)量) =ΔA×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V反總÷(W÷V提取×V) ÷T =2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        C標(biāo):Fe2+標(biāo)準(zhǔn)液最終濃度,15.625nmol/mL;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL;Cpr:上清液蛋白濃度,mg/mL;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積,50μL=0.05mL;V提取:加入提取液體積,1mL; T:反應(yīng)時(shí)間,30min;W:樣本質(zhì)量,g。

        注意事項(xiàng):

        1、 如果?A小于0.010或測定管吸光值接近空白管,可以增加樣本量或者延長反應(yīng)時(shí)間后再進(jìn)行測定;如果?A大于1或者A1大于1,建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 稱取0.1214g櫻桃番茄,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.665-0.127=0.538,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.525-0.083=0.442,帶入公式計(jì)算:

        FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=20.885 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1002g閩南葉片,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.188-0.104=0.084,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.525-0.083=0.442,帶入公式計(jì)算:

        FCR活性(U/g 質(zhì)量) =2.083×ΔA÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=3.951U/g 質(zhì)量

        參考文獻(xiàn):

        [1] Shabnam N , Kim M , Kim H .Iron (Ⅲ) oxide nanoparticles alleviate arsenic induced stunting in Vigna radiata[J].Ecotoxicology and Environmental Safety, 2019, 183(Nov.).

        [2 Kabir A H , Akther M S , Skalicky M ,et al.Downregulation of Zn-transporters along with Fe and redox imbalance causes growth and photosynthetic disturbance in Zn-deficient tomato[J].Scientific Reports, 2021, 11(1).

        [3] Ojeda M , Schaffer B , Davies F S .Root and Leaf Ferric Chelate Reductase Activity in Pond Apple and

        Soursop[J].Journal of Plant Nutrition, 2005, 27(8):1381-1393.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC4340/BC4345 亞鐵氧化酶(HP)活性檢測試劑盒

        BC4350/BC4355 組織鐵含量檢測試劑盒

        BC5410/BC5415 亞鐵離子含量檢測試劑盒


        高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法 高鐵螯合物還原酶活性檢測試劑盒 微量法


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