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        • 一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號
        產品名稱:

        一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-15
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Nitric Oxide(NO) Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1470
        規(guī)格50T/48S供貨周期現貨
        主要用途一氧化氮(NO)含量檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒說明書(酶法測定總NO

        可見分光光度法

        注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC1470

        規(guī)格:50T/48S

        產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體50μL×1

        2-8℃保存

        顯色液A

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        顯色液B

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        澄清劑

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前加入1.8 mL蒸餾水,-20分裝保存兩周,避免反復凍融;

        2、 試劑二:臨用前加入1mL蒸餾水,-20分裝保存4周,避免反復凍融;

        3、 試劑二工作液:臨用前根據樣本量按試劑二:蒸餾水=10μL590μL15T)的比例配制,當天用完;

        4、 試劑三:臨用前取一支加入550μL蒸餾水溶解,-20分裝保存兩周,避免反復凍融;

        5、 試劑五:臨用前根據樣本數量按照試劑五(V):蒸餾水(V=10μL450μL11T)的比例配制試劑五溶液,現用現配;

        6、 顯色液:臨用前根據樣本數量按照顯色液A液:顯色液B=1:1充分混勻,現配現用;

        7、 澄清劑:臨用前加入15mL蒸餾水,可震蕩或50℃加熱促進溶解。此溶液為飽和溶液,取上清使用即可,2-8℃可保存12周;

        8、 標準液:10μmol/mL亞*酸鈉。臨用前取20μL 10μmol/mL標準液,加入780μL蒸餾水,配制成0.25μmol/mL標準液,再取0.25μmol/mL標準液50μL和蒸餾水450 μL混合配制成0.025μmol/mL標準溶液。

        產品說明:

        一氧化氮(Nitric OxideNO)是一種極不穩(wěn)定的生物自由基,分子小,結構簡單,常溫下為氣體,微溶于水,具有脂溶性,可快速透過生物膜擴散,作為一種新型的生物信使分子,在細胞間及細胞內發(fā)揮傳遞信號的作用。其廣泛分布于生物體內各組織中,特別是神經組織中。在機體神經、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統中也起著十分重要的作用。

        NO在體內或水溶液中極易氧化生成NO2-NO3-,本法利用硝酸還原酶特異性將NO3-還原成NO2-,在酸性條件下,NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物,進一步與萘基乙烯基二胺偶合,產物在550nm處有特征吸收峰,測定其吸光值,可以計算NO含量。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 組織樣本:按質量(g: 提取液體積(mL1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.2g樣本,加入1.0mL提取液),冰浴勻漿后,于4℃,12000rpm,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        2. 細菌/細胞樣本:按細菌/細胞數量(104):提取液體積(mL500~1000 : 1的比例加入提取液(建議1000細菌/細胞加入1.0mL提取液),冰浴超聲破碎細菌/細胞(功率200w,超聲3s,間隔7s,總時間5min),然后于4℃,12000rpm,離心15min,棄沉淀,取上清液置于冰上待測。

        3. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

        二、測定步驟

        1.可見分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至550nm,蒸餾水調零。

        2.操作表:

        試劑名稱(μL

        測定管

        標準管

        空白管

        樣本

        240

        -

        -

        0.025μmol/mL標準液

        -

        240

        -

        蒸餾水

        -

        160

        400

        試劑一

        20

        -

        -

        試劑二工作液

        40

        -

        -

        試劑三

        20

        -

        -

        混勻,37℃反應120min

        -

        -

        試劑四

        40

        -

        -

        試劑五

        40

        -

        -

        混勻,37℃反應30min

        -

        -

        顯色液

        400

        400

        400

        混勻,常溫靜置10min,于550nm處測定各管吸光值,分別記為A測定、A標準和A空白,計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標準=A標準-A空白??瞻坠芎蜆藴使苤恍铚y1-2次。

        三、NO含量計算

         

        1. 按樣本蛋白濃度計算

        NO含量(μmol/mg prot= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷V×Cpr= 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

        2. 按樣本質量計算

        NO含量(μmol/g 質量)= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷W×V÷V樣總) = 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W

        3. 按細菌/細胞數量計算

        NO含量(μmol/104 cell=ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷V×N÷V樣總) = 0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷N

        4. 按液體體積計算

        NO含量(μmol/mL= ΔA測定×C÷ΔA標準)×V÷V= 0.025×ΔA測定÷ΔA標準

        C標:標準管濃度,0.025μmol/mL;V樣:加入樣本體積,0.24mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g ;N:細菌/細胞總數,以104計。

        注意事項:

        1、 如果樣本勻漿液離心后上清仍舊渾濁,可直接進行反應,反應后在1mL反應液中加入250μL澄清劑,混勻后靜置5min,離心后取1mL上清測定,這種情況下需將空白管和標準管進行相同處理。

        2、 如果?A測定小于0.01,可以增加樣本量后再進行測定;如果?A測定大于0.8,建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

        3、 如果樣本上清有顏色(在550nm下有吸收峰),則需要補測樣本的對照管,即將顯色液用相同體積的蒸餾水代替。在550 nm下測定吸光值A,分別記為 A標準、A測定、A空白、A對照,計算ΔA標準=A標準-A空白,ΔA測定=A測定-A對照。此時試劑盒規(guī)格為50T/24S。

        實驗實例:

        1. 0.107g玉蘭葉片樣本,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.205-0=0.205ΔA標準=A標準-A空白=0.364-0=0.364,按樣本質量計算得:

        NO含量(μmol/g 質量)=0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W = 0.025×0.205÷0.364÷0.107=0.132 μmol/g 質量。

        2. 0.0868g小鼠心臟樣本,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.212-0=0.212,ΔA標準=A標準-A空白=0.364-0=0.364,按樣本質量計算得:

        NO含量(μmol/g 質量)=0.025×ΔA測定÷ΔA標準÷W = 0.025×0.212÷0.364÷0.0868=0.168 μmol/g 質量。

        3. 240μL牛血清樣本,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.369-0=0.369,ΔA標準=A標準-A空白=0.364-0=0.364,按液體體積計算得:

        NO含量(μmol/mL=0.025×ΔA測定÷ΔA標準 = 0.025×0.369÷0.364=0.025 μmol/mL

        相關發(fā)表文獻:

        [1] Peng X, Zhu L, Guo J, et al. Enhancing biocompatibility and neuronal anti-inflammatory activity of polymyxin B through conjugation with gellan gum[J]. International journal of biological macromolecules, 2020, 147: 734-740.

        相關系列產品:

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         BC1480/BC1485 水土中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒

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        一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號 一氧化氮(NO)含量檢測試劑盒 信號 

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