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        • gu氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 氮代謝
        產(chǎn)品名稱:

        gu氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 氮代謝

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-24
        gu氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 氮代謝
        測定意義:GOGAT分布于植物中,和gu氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán),參與氨同化的調(diào)控。
        測定原理:GOGAT催化gu氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸,形成兩分子的gu氨酸;同時NADH氧化生成NAD+,340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC0070
        規(guī)格50管/48樣供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:GOGAT分布于植物中,和g氨酰胺合成酶共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán),應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        GU氨酸合成酶(GOGAT)活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        貨號:BC0070

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 工作液的配制:取試劑二、試劑三、試劑四各一支加入30 mL試劑一中溶解,現(xiàn)用現(xiàn)配,可分裝后-20保存,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明:

        GOGAT主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非綠色組織的前質(zhì)體中,和GU氨酰胺合成酶(GS)共同構(gòu)成GS/GOGAT循環(huán),參與氨同化的調(diào)控。

        GOGATNADH為電子供體,催化GU氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸形成兩分子的GU氨酸,NADH340nm吸光度的下降速率可以反映GOGAT活性大小。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。  

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 工作液提前配置,平衡至室溫。

        3、 樣本測定

        試劑名稱(μL

        測定管

        工作液

        900

        樣本

        100

        混勻,加樣本的同時開始計(jì)時,在340 nm波長下記錄20秒時的初始吸光度A1比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入25℃水浴或培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)5分鐘;迅速取出比色皿并擦干,340nm下比色,記錄520秒時的吸光度A2,計(jì)算ΔA=A1-A2

        三、GOGAT活性計(jì)算

        1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個酶活力單位。

        GOGAT活性U/mg prot=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(V×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr

        2)按樣本質(zhì)量計(jì)算:

        單位的定義:每g組織每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

        GOGAT活性U/g 質(zhì)量)=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(W ×V÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W

        3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

        單位的定義:每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

        GOGAT活性U/104 cell=[ΔA×V反總÷ε×d×109]÷(500×V÷V樣總) ÷T=0.643×ΔA

        V反總:反應(yīng)體系總體積,10-3L;εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬;109:單位換算系數(shù),1mol =109nmol。

        注意事項(xiàng):

        1、測定期間樣本在冰上放置,以免變性和失活。

        2、最好兩個人同時做此實(shí)驗(yàn),一個人比色,一個人計(jì)時,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        3、當(dāng)A1大于1.5或者ΔA大于0.6時,建議將樣本用蒸餾水稀釋后測定,當(dāng)ΔA過小時,可以延長酶促反應(yīng)時間(10min15min)或者加大加入的樣本體積進(jìn)行測量。

        4、由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.1g紅豆芽加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA= A1-A2=1.23-1.067=0.163,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        GOGAT活性U/g 質(zhì)量)=321.5×ΔA÷W=321.5×0.163÷0.1=524 U/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g稗草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA= A1-A2=1.416-1.404=0.012,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        GOGAT活性U/g 質(zhì)量)=321.5×ΔA÷W=321.5×0.012÷0.1=38.58 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        [1] Fei Ding,Qiannan Hu,Meiling Wang,et al. Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants. International Journal of Molecular Sciences. December 2018;(IF4.183)

        [2] Jie Wang,Wei Zhou,Hui Chen,et al. Ammonium Nitrogen Tolerant Chlorella Strain Screening and Its Damaging Effects on Photosynthesis. Frontier in Immunology. January 2019;(IF4.259)

        [3] Meng L, Li W, Zhang S, et al. Effects of sucrose amendment on ammonia assimilation during sewage sludge composting[J]. Bioresource technology, 2016, 210: 160-166.

        參考文獻(xiàn):

        [1] del Pilar Cordovilla M, Pérez J, Ligero F, et al. Partial purification and characterization of NADH-glutamate synthase from faba bean (Vicia faba) root nodules[J]. Plant science, 2000, 150(2): 121-128.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0080/BC0085 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒

        BC1500/BC1505 植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC1520/BC1525 植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC1480/BC1485  水土中亞硝酸鹽含量測定試劑盒

        BC1490/BC1495 食品中亞硝酸鹽含量檢測試劑盒


        gu氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 氮代謝  gu氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 氮代謝



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