羧酸酯酶（CarE）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0840
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前取1瓶先加入1.25mL無水乙醇，震蕩使其大部分溶解，再加入8.75mL試劑三，震蕩至充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周。

2. 試劑二：臨用前取1瓶試劑二中加入18mL試劑三，震蕩使其充分溶解。本試劑溶解后為淡黃色，且在常溫下不穩(wěn)定，建議根據(jù)樣本量取適當(dāng)配好的試劑二置于冰上待用，剩余試劑分裝后置于-20℃保存一周，禁止反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：
哺乳動物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于絲*酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解，但不能催化水解乙酰*堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運輸和代謝，并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān)，有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍(lán)顯色；在450nm光吸收增加速率，計算CarE活性。


注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、超聲破碎儀，蒸餾水和無水乙醇。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 試劑二為-20℃儲存試劑，在常溫下不穩(wěn)定，一般常溫放置2-3小時后即可明顯發(fā)現(xiàn)液體由淺黃色變?yōu)闇\褐色

（液體變褐色視為變質(zhì)，不可用）。建議試驗前根據(jù)樣本量計算所需試劑二的用量，在試劑二溶解后，留取所需用量置于冰上待用，剩余試劑可分裝后-20℃儲存。

1. 動物組織樣本一般稀釋8倍或更大稀釋倍數(shù)后進(jìn)行操作測定。

2. 當(dāng)吸光值大于1時，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

3. 建議反應(yīng)時保持37℃的環(huán)境，且逐一比色。

實驗實例：

1. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋32倍后按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測得計算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA測定管=A2測-A1測=0.959-0.185=0.774，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

CarE酶活(U/g質(zhì)量)=4×(ΔA測定管-ΔA空白管)÷W×F=4×(0.774-0.062)÷0.1×32=911.36 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠腎臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋8倍后按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測得計算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA測定管=A2測-A1測=0.586-0.231=0.355，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

CarE酶活(U/g質(zhì)量)= 4×(ΔA測定管-ΔA空白管)÷W×F=4×(0.355-0.062)÷0.1×8=93.76 U/g 質(zhì)量。

1. 取馬血清用蒸餾水稀釋8倍后按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測得計算ΔA空白管=A2空-A1空=0.202-0.140=0.062，ΔA測定管=A2測-A1測=0.621-0.130=0.491，計算酶活得：

CarE酶活(U/mL)=4×(ΔA測定管-ΔA空白管) ×F=4×(0.491-0.062)×8=13.728 U/mL 質(zhì)量。
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