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        • 轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒
        • 轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-09
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Transhydrogenase-2 Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S
        轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC3260
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        轉(zhuǎn)氫酶-2TH-2活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        貨號:BC3260
        規(guī)格:50T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體50 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一粉劑×2-20℃保存
        試劑二粉劑×2-20℃保存
        試劑三液體50 mL×1瓶2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:臨用前取1瓶加入6 mL試劑三。用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融。

        2. 試劑二:臨用前取1瓶加入10 mL試劑三。用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明:
        轉(zhuǎn)氫酶位于線粒體的內(nèi)膜上,又稱為線粒體復(fù)合體六,催化NADH+NADP+和NAD++NADPH相互轉(zhuǎn)化,調(diào)節(jié)線粒體NAD(H)NADP(H)平衡。把逆向反應(yīng)稱為TH-2,催化NADPHNAD+生成NADP+和NADH。
        NADH和NADPH均在340nm有特征吸收,因此TH催化的轉(zhuǎn)氫反應(yīng)不能導(dǎo)致340nm吸光度發(fā)生變化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸(APAD+)替代NAD+,TH-2催化APAD+還原生成APADH,APADH375nm有特征光吸收,測定375nm光吸收的增加速率,來計算TH-2活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
        注意事項:

        1. 如果測定的吸光值過高(高于1.2)或者ΔA大于0.25時,可用提取液或試劑三稀釋上清液后再測定。

        2. 樣本蛋白濃度需自行測定。由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

        3. ΔA對照或ΔA測定出現(xiàn)負(fù)值為正?,F(xiàn)象。

        4. 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本質(zhì)量計算,則需加測胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。

        5. 本試劑盒試劑足夠完成50管反應(yīng)。

        6. 附:按樣本重量計算公式:(樣本檢測數(shù)為50T/12S

        A、上清中TH-2活力的計算
        單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個酶活性單位。
        TH-2(U/g 質(zhì)量)=[ΔA1×V反總÷ε×d]÷(W÷V提取×V樣本) ÷T=498×ΔA1÷W
        ΔA1:上清測定值;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;εAPADH的消光系數(shù),6.7×10-3mL/nmol/cm;d:比色皿光徑,1cmV提?。杭尤胩崛∫后w積,1.0mL;V樣本:樣本體積,0.1mL; T:反應(yīng)時間,3min。
        B、沉淀中TH-2活力的計算
        單位的定義:每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol APADH定義為一個酶活性單位。
        TH-2(U/g 質(zhì)量)=[ΔA2×V反總÷ε×d]÷(W÷V提取×V樣本) ÷T=398×ΔA1÷W
        ΔA2:沉淀測定值;V反總:反應(yīng)總體積,1mL;εAPADH的消光系數(shù),6.7×10-3mL/nmol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V提?。簭?fù)溶沉淀的提取液體積,0.8mL;V樣本:樣本體積,0.1mLT:反應(yīng)時間,3min。
        C、樣本復(fù)合體TH-2總活力的計算
        樣本TH-2總活力即為上清中TH-2活力與沉淀中TH-2活力之和。
        按樣本質(zhì)量計算:復(fù)合體TH-2(U/g 質(zhì)量)=498×ΔA1÷W+398×ΔA2÷W


        參考文獻:

        1. Vandock K P, Drummond C A, Smith S L, et al. Midgut and fatbody mitochondrial transhydrogenase activities during larval-pupal development of the tobacco hornworm, Manduca sexta[J]. Journal of insect physiology, 2010, 56(7): 774-779.

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        轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒 轉(zhuǎn)氫酶-2活性檢測試劑盒

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