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        • 檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶
        • 檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶
        產(chǎn)品名稱:

        檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-15
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Citrate Synthase(CS) Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S ; 25T/12S ; 10T/5S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC1060
        規(guī)格10T/5S 25T/12S 50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途測定意義:CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        檸檬酸合酶(CS)活
        性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法
        貨號: BC1060
        規(guī)格: 25T/12S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體15 mL×1瓶-20保存
        試劑液體2.5 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑液體0.2 mL×1支-20保存
        試劑液體45 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑液體2mL×12-8℃保存
        試劑五粉劑×2-20保存
        試劑六粉劑×1-20保存

        溶液的配制:

        1. 試劑:臨用前加入500 μL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存;

        2. 試劑:臨用前加入1.5 mL雙蒸水,用不完的試劑仍-20℃保存

        產(chǎn)品說明:
        CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)第一個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點之一。
        CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔*A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在412nm處有特征吸光值。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器用品:
        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。
        操作步驟
        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)
        組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

        1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細(xì)胞,加入1mL提取液和10μL 試劑二,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

        2. 將勻漿液600g,4℃離心5min。將上清液移至另一離心管中,11000g4℃離心10min。

        3. 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的CS。

        4. 在沉淀中加入200μL試劑一和2μL 試劑二,反復(fù)吹打充分混勻,用于CS測定,并用于蛋白濃度測定。

        、測定步驟

        1. 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑三置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中預(yù)熱10min左右(保證無沉淀)。

        3. 操作表:在1mL玻璃比色皿中分別加入

        試劑名稱(μL測定管對照管
        試劑三860930
        試劑四3535
        試劑五35-
        樣本3535
        試劑六35-

        將上述試劑按順序加入1mL玻璃比色皿中,加試劑六的同時開始計時,記錄412nm波長下10秒時的初始吸光度A1,之后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘;迅速取出比色皿并擦干,412nm下記錄210秒時的吸光度A2,并計算測定管的ΔA1=A2-A1,對照管的ΔA1’=A2’-A1’ΔA=ΔA1-ΔA1’。
        、CS活性計算
        按樣本蛋白濃度計算
        單位的定義:37℃或25℃下每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。
        CS(U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總÷Cpr×V樣本)÷T=1050×ΔA÷Cpr
        εTNB的消光系數(shù),13.6×10-3mL/(nmol·cm);V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;d:比色皿光徑,1cm;V樣本:加入的樣本體積,0.035mL;T:反應(yīng)時間,2min;Cpr:樣本的蛋白濃度,mg/mL。
        注意事項:
        1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失活。
        2、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃25℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃25℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
        3、最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
        4、推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本質(zhì)量計算,則需加測胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。
        5、附:使用樣本鮮重計算公式
        單位的定義:37℃或25℃下每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB定義為一個酶活力單位。
        CS上清(U/g 質(zhì)量)=ΔA上清÷ε÷d×V反總÷W×V樣本÷V提?。?span style="font-family: Times New Roman, Times, serif">÷T=1061×ΔA上清÷W
        CS沉淀(U/g 質(zhì)量)=ΔA沉淀÷ε÷d×V反總÷W×V樣本÷V樣總)÷T=212×ΔA沉淀÷W
        CS(U/g 質(zhì)量)=CS上清+CS沉淀=1061×ΔA上清÷W+212×ΔA沉淀÷W
        ΔA上清:上清測定值;ΔA沉淀:沉淀測定值;εTNB的消光系數(shù),13.6×10-3mL/(nmol·cm);V反總:反應(yīng)體系總體積,1mL;d:比色皿光徑,1cmV樣本:加入的樣本體積,0.035mL;V提取:提取液體積,1.01mL;V樣總:溶解沉淀的總體積,0.202mL;T:反應(yīng)時間,2minW:樣本質(zhì)量,g。
        實驗實例:
        0.1g小鼠心臟樣本加入1mL提取液和10μL試劑二進(jìn)行勻漿研磨,取上清后再離心,取上清,取沉淀后加入200μL劑一和2μL試劑二,之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測吸光度后計算上清中:ΔA1= A2-A1=1.213-0.7=0.513,ΔA1’=A2’-A1’=0ΔA上清=ΔA1-ΔA1’=0.513;沉淀中:ΔA 1=A2-A1=0.447-0.133=0.314ΔA1’=A2’-A1’=0,ΔA沉淀=ΔA1-ΔA1’=0.314,按樣本質(zhì)量計算酶活得:
        CS(U/g 質(zhì)量)=CS上清+CS沉淀=1061×ΔA上清÷W+212×ΔA沉淀÷W
        = 1061×0.513÷0.1+212×0.314÷0.1=6108.7U/g 質(zhì)量。
        相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):

        1. Ming Song,Fangfang Chen,Yihui Li,et al. Trimetazidine restores the positive adaptation to exercise training by mitigating statin-induced skeletal muscle injury. Journal of Cachexia, Sarcopenia and Muscle. November 2017;(IF10.754)

        2. Zhang J, Lv J, Xie J, et al. Nitrogen Source Affects the Composition of Metabolites in Pepper (Capsicum annuum L.) and Regulates the Synthesis of Capsaicinoids through the GOGAT–GS Pathway[J]. Foods, 2020, 9(2): 150.

        參考文獻(xiàn):
        [1]  Agostinho F R, Réus G Z, Stringari R B, et al. Treatment with olanzapine, fluoxetine and olanzapine/fluoxetine alters citrate synthase activity in rat brain[J]. Neuroscience letters, 2011, 487(3): 278-281.
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0310/BC0315 輔酶NADH)含量檢測試劑盒
        BC1030/BC1035 NAD激酶(NADK)活性檢測試劑盒
        BC0630/BC0635 NADH氧化酶(NOX)活性檢測試劑盒
        BC1130/BC1135 NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)活性檢測試劑盒

        檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶 檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒 輔酶

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