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        • 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶測試盒 糖酵解
        產(chǎn)品名稱:

        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶測試盒 糖酵解

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-15
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        果糖-1,6-二磷酸醛縮酶測試盒 糖酵解
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Fructose-bisphosphate aldolase(FBA) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2270
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途丙酮酸(PA)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        果糖-1, 6-二磷酸醛縮酶(FBA)活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        貨號:BC2270
        規(guī)格:50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液一液體60 mL×1瓶2-8保存
        提取液二液體60 mL×1瓶2-8保存
        試劑一液體25 mL×1瓶2-8保存
        試劑二粉劑×1-20℃保存
        試劑三粉劑×12-8保存
        試劑四液體20 μL×1瓶2-8保存
        試劑五液體200 μL×1瓶-20℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融

        2. 試劑三:臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融;

        3. 試劑四:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融;

        4. 試劑五:液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加入5 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20保存,禁止反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明:
        果糖1,6-二磷酸醛縮酶(Fructose 1,6 bisphosphate aldolase,FBA)(EC4.1.2.13)是糖酵解、糖異生、磷酸戊糖途徑及光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶,催化果糖1,6-二磷酸可逆的裂解為磷酸二羥丙 酮和3-磷酸甘油醛,廣泛存在于動植物及微生物體內(nèi),在各種逆境脅迫下表現(xiàn)不同的響應(yīng)。
        果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙 酮,在磷酸丙糖異構(gòu)酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙 酮生成NADα-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。
        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計(jì)、分析天平、低溫離心機(jī)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、漩渦震蕩儀、超聲破碎儀、冰。
        操作步驟:

        • 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))


        總FBA酶:
        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液一)充分冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
        細(xì)菌或細(xì)胞:按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
        液體:直接檢測。
        胞漿和葉綠體FBA酶的分離:

        1. 按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15-10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),手工快速研磨或勻漿,之后于4℃,200g離心5min;

        2. 棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min(離心時緩慢加速和降速);

        3. 取上清用于測定胞漿FBA酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,上清即為葉綠體中FBA酶活性。

        建議測定總FBA酶活性,按照步驟提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBA,則按照步驟提取粗酶液。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 樣本測定:(在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑)


        測定管空白管
        試劑一(µL)500500
        試劑二(µL)100100
        試劑三(µL)100100
        試劑四(µL)100100
        試劑五(µL)100100
        樣本(µL)100-
        蒸餾水(µL)-100
        充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37(哺乳動物)或25(其他物種)水浴5min,拿出迅速擦干測定310s時的吸光值A2,分別記為A1測定、A2測定、A1空白和A2空白,計(jì)算ΔA測定管=A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次)

        注意:如果檢測樣本量大,可以將試劑一、二、三、四、五按照5:1:1:1:1(V:V:V:V:V)的比例配成工作液待用(現(xiàn)配現(xiàn)用)。
        三、FBA酶活計(jì)算

        1. 按蛋白濃度計(jì)算

        酶活單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個酶活力單位。
        FBA酶活(U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

        1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活單位定義:每g組織每分消耗1nmolNADH定義為一個酶活力單位。
        FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷W ×V÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

        1. 按照細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量計(jì)算

        酶活單位定義:每104個細(xì)胞或細(xì)菌每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。
        FBA酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷(V×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量(萬個)
        (4)按液體體積計(jì)算
        酶活單位定義:每mL液體每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個酶活力單位。
        FBA酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T=321.54×ΔA
        V反總:反應(yīng)體系總體積,0.001Lε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,5min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。
        注意事項(xiàng):

        1. ΔA大于0.8建議將樣本用相應(yīng)提取液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧龠M(jìn)行測定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

        2. 若是植物樣本,建議在提取完成后2h內(nèi)檢測完,如果樣本量過大,建議分批提取、檢測。

        3. 由于提取液一中含有一定濃度的蛋白(約0.5mg/mL),所以在測定樣品蛋白濃度是需要減去提取液本身的蛋白含量。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清稀釋8倍后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.257-1.06=0.197,ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.164-1.16=0.004,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.197-0.004=0.193,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W×8(稀釋倍數(shù))= 321.54×0.193÷0.1×8(稀釋倍數(shù))=4964 U/g 質(zhì)量。

        2. 取0.1g綠蘿加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.438-1.386=0.052ΔA空白管=A1空白-A2空白=1.164-1.16=0.004,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.052-0.004=0.048,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活:FBA酶活(U/g 質(zhì)量)=321.54×ΔA÷W= 321.54×0.048÷0.1=154.3392 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2240/BC2245果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量檢測試劑盒
        BC0530/BC0535磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒
         果糖-1,6-二磷酸醛縮酶測試盒 糖酵解 果糖-1,6-二磷酸醛縮酶測試盒 糖酵解


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