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        • 磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)試劑盒 光合作用
        產(chǎn)品名稱:

        磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)試劑盒 光合作用

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-18
        磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)試劑盒 光合作用
        單位

        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        英文名稱
        Triose Phosphate Isomerase (TPI) Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2260
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        紫外分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

        貨號(hào):BC2260

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體35mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×3

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取1瓶加入3mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2、 試劑三:臨用前取1瓶加入3mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3、 試劑四:提供一個(gè)棕色試劑空瓶,臨用前取一支試劑四加入2.5mL蒸餾水,充分溶解;用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        植物葉綠體中磷酸丙糖異構(gòu)酶(TPI)是光合作用中參與calvin循環(huán)的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙 酮之間的轉(zhuǎn)化,磷酸二羥丙 酮能快速透過(guò)葉綠體的包膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),并在其中逐步轉(zhuǎn)化為蔗糖。

        磷酸丙糖異構(gòu)酶將磷酸二羥丙 酮轉(zhuǎn)化為3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛與NAD3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構(gòu)酶的活性的高低。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計(jì)、天平、水浴鍋、臺(tái)式低溫離心機(jī)、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、細(xì)胞超聲破碎儀、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1. TPI提?。?/span>按照組織質(zhì)量(g)︰提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)進(jìn)行冰浴勻漿,勻漿后冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間1min),于4℃8000g離心10min,取上清,置于冰上待測(cè)。

        2. 胞漿和葉綠體TPI的分離:


        (1) 按照組織質(zhì)量(g)︰提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)進(jìn)行冰浴勻漿,勻漿后于4℃200g離心5min,棄沉淀,留取上清。

        (2) 上清于4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿TPI活性

        (3) 在第二步離心后的沉淀加1mL提取液二,震蕩混勻后冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中TPI活性。

        建議測(cè)定總TPI活性,按照步驟1提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的TPI,則按照步驟2提取粗酶液。

        二、測(cè)定步驟

        1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑一預(yù)熱15min以上。

        3. 測(cè)定管:依次取600μL試劑一、100μL試劑二、100μL試劑三、100μL試劑四和100μL粗酶液于1mL石英比色皿,迅速吹打混勻,立即記錄340nm20s的吸光值A1,迅速置于37℃水浴鍋或培養(yǎng)箱5min,拿出迅速擦干測(cè)定5min20s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。

        三、磷酸丙糖異構(gòu)酶活性計(jì)算

        1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        酶活單位定義:每mg組織蛋白每min生成1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        TPI活性(U/mg prot)=(ΔA÷ε÷d)×V×109÷V÷Cpr÷T×F=321.54×ΔA÷Cpr×F

        2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        酶活單位定義:每g組織每min生成1 nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。

        TPI活性(U/g 質(zhì)量)=(ΔA÷ε÷d)×V×109÷V×V÷W÷T×F=321.54×ΔA÷W×F

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cmd:比色皿光徑,1cm;109:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1mol=109nmolV反:反應(yīng)總體積,1.0×10-3LV樣:加入樣本上清體積,0.1mLV提:加入提取液一或提取液二的體積,1mLW:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5min;F:稀釋倍數(shù)。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 稱取0.11g綠蘿葉片加入1mL提取液一進(jìn)行勻漿研磨,超聲破碎后離心取上清,按照測(cè)定步驟操作,用1mL石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA= A2-A1=0.172-0.138=0.034,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

        TPI活性(U/g 質(zhì)量)=321.54×0.034÷0.11=99.39 U/g 質(zhì)量。

        2. 稱取0.1033g玉蘭葉片加入1mL提取液一進(jìn)行勻漿研磨,超聲破碎后離心取上清,按照測(cè)定步驟操作,用1mL石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA= A2-A1=1.101-1.056=0.045,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得

        TPI活性(U/g 質(zhì)量)=321.54×0.045÷0.1033=140.07 U/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0530/BC0535 磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0540/BC0545 丙 酮酸激酶(PK)活性檢測(cè)試劑盒

        BC0740/BC0745 己糖激酶(HK)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2190/BC2195 磷酸烯醇式丙 酮酸羧化酶(PEPC)活性檢測(cè)試劑盒

        BC2210/BC2215 3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測(cè)試劑盒


        磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)試劑盒 光合作用 磷酸丙糖異構(gòu)酶活性檢測(cè)試劑盒 光合作用



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