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        • 果糖-1,6-二磷酸含量檢測試劑盒 糖酵解
        產(chǎn)品名稱:

        果糖-1,6-二磷酸含量檢測試劑盒 糖酵解

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-12-04
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        果糖-1,6-二磷酸含量檢測試劑盒 糖酵解
        單位

        英文名稱
        Fructose-1,6-diphosphate(FDP)Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC2240
        規(guī)格50T/48s供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度
        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
        貨號:BC2240
        規(guī)格:50T/48S
        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液一液體30 mL×1瓶2-8℃保存
        提取液二液體5 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體20 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二液體×22-8℃保存
        試劑三液體15 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑四液體40 mL×1瓶2-8℃保存
        標準品粉劑×12-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前取一支加入0.5 mL蒸餾水,充分溶解后待用,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2. 標準品:臨用前加入1176μL 蒸餾水充分溶解,配制成50μmol/mL果糖-1,6-二磷酸標準溶液,2-8℃可以保存4周。

        產(chǎn)品說明:
        果糖1,6-二磷酸(fructose-1,6-diphosphate, FDP)是糖酵解過程中的一種重要的中間產(chǎn)物,對多種酶具有調(diào)節(jié)作用,具有改善細胞能量代謝、增加能量利用、抗心律失常及抗組織過氧化等作用,廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)藥。
        醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸裂解,產(chǎn)物與2,4-二* 苯 肼在酸性介質(zhì)中反應(yīng)生成2,4-二*苯腙,在堿性溶液中呈紅棕色,在540 nm處有特征吸收峰。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
        需自備的儀器和用品:
        可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰、蒸餾水和EP管。
        操作步驟:
        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
        細胞:按照細胞數(shù)量(104個):提取液一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
        血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。
        注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 將50µmol/mL的果糖-1,6-二磷酸標準液用蒸餾水倍比稀釋為1.5625、0.78125、0.390.2、0.1 µmol/mL的標準溶液備用。

        3. 標準品稀釋表:

        序號稀釋前濃度(μmol/mL標準液體積(µL)蒸餾水體積(µL)稀釋后濃度μmol/mL
        150309301.5625
        21.56252002000.78125
        30.781252002000.39
        40.392002000.2
        50.22002000.1

        實驗中每個標準管需100µL標準溶液。

        1. 樣本測定:(在1.5 mL離心管中操作)

        試劑名稱(µL)對照管測定管空白管標準管
        樣本100100--
        蒸餾水--100-
        標準溶液---100
        試劑一220200220200
        試劑二-20-20
        充分混勻,37準確反應(yīng)2 h
        試劑三200200200200
        充分混勻,37準確反應(yīng)20 min
        試劑四500500500500
        充分混勻,37準確反應(yīng)10 min
        1mL玻璃比色皿中測定540nm處吸光值A,分別記為A對照管、A測定管、A空白管和A標準管。計算ΔA=A測定管-A對照管,ΔA標準=A標準管-A空白管。(空白管和標曲只需檢測1-2次)

        三、FDA含量計算

        1. 標準曲線的繪制:

        以各個標準溶液的濃度為x軸,其對應(yīng)的ΔA標準為y軸,繪制標準曲線,得到標準方程y= kx+b,將ΔA帶入方程得到xµmol/mL)。

        1. FDP含量的計算:

        (1)按樣本質(zhì)量計算
        FDP含量(µg/g 質(zhì)量)=x×(V上清+V提取液二)×M÷(W×V上清÷V提取液一)=403.75x÷W
        (2)按細胞數(shù)量計算
        FDP含量(µg/104 cell)=x×(V上清+V提取液二)×M÷(V上清÷V提取液一×N)=403.75x÷N
        (3)按液體體積計算
        FDP含量(µg/mL=x×V上清+V提取液二)×M÷ [V液體×V上清÷V提取液一+V液體)]=4441.25x
        V上清:提取時上清液體積,0.8mLV提取液二:提取液二的體積,0.15mL;V提取液一:提取液一的體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,gM:果糖-1,6-二磷酸分子質(zhì)量,340V液體:液體樣本體積,0.1mL;N:細胞數(shù)量,以萬計。
        注意事項:
        ΔA測定大于0.5時,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC2270/BC2275  果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(FBA)活性檢測試劑盒
        BC2250/BC2255  3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活性檢測試劑

        果糖-1,6-二磷酸含量檢測試劑盒 糖酵解 果糖-1,6-二磷酸含量檢測試劑盒 糖酵解


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