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        • 3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒 光合作用
        產(chǎn)品名稱:

        3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒 光合作用

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-15
        產(chǎn)品簡介
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒 光合作用
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase(GAPDH) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S ; 25T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC2210
        規(guī)格25T/24S 50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合


        3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        貨號(hào): BC2210
        規(guī)格: 25T/24S
        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體30 mL×1瓶4℃保存
        試劑一粉劑×1-20保存
        試劑二液體25 mL×1瓶4℃保存
        試劑三液體15 µL×14℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。根據(jù)用量按照試劑三:蒸餾水為3:100的體積比例充分混勻,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        2. 工作液的配制:將試劑二全部倒入試劑一瓶中,充分溶解,根據(jù)需要取一定的量37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10min;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。

        產(chǎn)品說明
        GAPDH(EC1.2.1.12)催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途徑的關(guān)鍵酶,與糖異生途徑、體內(nèi)血糖濃度的維持和糖尿病的發(fā)生密切相關(guān),在機(jī)體糖、脂、蛋白代謝紊亂疾病中發(fā)揮重要作用。

        1. 磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3-二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3-二磷酸甘油酸和NADH生成3-磷酸甘油醛、無機(jī)磷和NAD+,340nm處測定NADH的減少量可反映GAPDH活性的高低。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
        需自備的儀器用品:
        紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
        操作步驟:
        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)
        組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心20min,取上清,置冰上待測。
        細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
        血清(漿):直接檢測。
        二、測定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 操作表:在1mL石英比色皿中分別加入下列試劑:

         

        試劑名稱空白管測定管
        樣本(µL)
        30
        蒸餾水(µL)30
        試劑三(µL)2020
        工作液(µL)950950
        在1mL石英比色皿中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定10s時(shí)的吸光值A1,迅速置于37(哺乳動(dòng)物)或25℃(其他物種)水浴5min,拿出迅速擦干測定5min10s時(shí)的吸光值A2,計(jì)算ΔA測定管= A1測定-A2測定,ΔA空白管=A1空白-A2空白,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管。(空白管只需做1-2次)

        三、GAPDH酶活計(jì)算
        1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
        酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
        GAPDH酶活(U/mg prot)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=1072×ΔA÷Cpr
        2、按樣本質(zhì)量計(jì)算
        酶活定義:每g組織每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
        GAPDH酶活(U/g 質(zhì)量)=ΔA÷(ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T=1072×ΔA÷W
        3、按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
        酶活定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
        GAPDH酶活(U/104 cell)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷500×V÷V樣總)÷T=2.14×ΔA
        4、按照血清(漿)體積計(jì)算
        酶活定義:每mL樣本每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。
        GAPDH酶活(U/mL=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷T= 1072×ΔA
        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.001L;V樣:反應(yīng)體系中樣本體積,0.03mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;W:樣本質(zhì)量,gT:反應(yīng)時(shí)間:5min;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol。
        注意事項(xiàng):

        1. 當(dāng)A1小于0.8ΔA大于0.7時(shí),建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測定。

        2. 空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.01。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心20min,取上清置冰上之后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.815-0.158=0.657,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.865-0.864=0.001,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.656,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:GAPDH酶活(U/g質(zhì)量)=1072×ΔA÷W=7032.32 U/g質(zhì)量

        2. 取0.1g三葉草加入1mL提取液,進(jìn)行冰浴勻漿,然后8000g,4℃,離心20min,取上清置冰上,之后按照測定步驟操作,測得計(jì)算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.026-1.017=0.009,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.865-0.864=0.001,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.008,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:GAPDH酶活(U/g質(zhì)量)= 1072×ΔA÷W=85.76 U/g質(zhì)量。


        相關(guān)系列產(chǎn)品:
        BC0990/BC0995 植物葉綠素含量檢測試劑盒
        BC4330/BC4335 植物類胡蘿卜素含量檢測試劑盒

        3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒 光合作用 3-磷酸甘油醛脫氫酶活性測試盒 光合作用

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