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        • 磷酸果糖激酶(PFK)測試盒 糖代謝
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        產品名稱:

        磷酸果糖激酶(PFK)測試盒 糖代謝

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-24
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        磷酸果糖激酶(PFK)測試盒 糖代謝
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Phosphofructokinase(PFK) Activity Assay Kit
        檢測方法
        紫外分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC0530
        規(guī)格50T/48S供貨周期現貨
        主要用途測定意義:PFK(EC 2.7.1.11)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合



        磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒說明書
        紫外分光光度法
        注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
        貨號:BC0530
        規(guī)格:50T/48S
        產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

        試劑名稱規(guī)格保存條件
        提取液液體60 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑一液體45 mL×1瓶2-8℃保存
        試劑二A粉劑×1-20℃保存
        試劑二B粉劑×1-20℃保存
        試劑二C粉劑×2-20℃保存
        試劑二D粉劑×1-20℃保存
        試劑三液體45μL×1支2-8℃保存
        試劑四液體20μL×1支2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二A:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復凍融;

        2. 試劑二B:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復凍融;

        3. 試劑二C:臨用前取一支加入0.25mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復凍融;

        4. 試劑二D:臨用前加入1mL蒸餾水,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復凍融;

        5. 試劑三:臨用前根據用量按照試劑三:蒸餾水為2μL:13μL(約3T)的體積比例充分混勻,現用現配;

        6. 試劑四:臨用前根據用量按照試劑四:蒸餾水為4μL:65μL(約13T)的體積比例充分混勻,現用現配;

        7. 工作液的配制:根據樣本量按試劑一:試劑二A:試劑二B:試劑二C:試劑二D =22mL0.5mL0.5mL0.25mL0.5mL(約29T)的比例配制工作液,現用現配;

        產品說明:
        磷酸果糖激酶(Phosphofructokinase,PFK,EC 2.7.1.11)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,負責將果糖-6-磷酸和ATP轉化為果糖-1,6二磷酸和ADP,是糖酵解過程的關鍵調節(jié)酶之一。
        PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP,*酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PFK活性。
        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。


        需自備的儀器和用品:
        紫外分光光度計、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
        “具體操作步驟詳見“產品資料"附件"
        注意事項:



          1. 測定過程中試劑三、試劑四和樣本在冰上放置,以免變性和失活。

          2. 比色皿中反應液的溫度必須保持37℃,取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水,將此燒杯放入37℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

          3. 最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結果的準確性。

          4. ΔA大于0.5,需將酶液用酶提取液稀釋,使ΔA小于0.5,可提高檢測靈敏度。注意同步修改計算公式。


        實驗實例:

        1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清之后按照測定步驟操作,測得計算ΔA= A1-A2 = 1.375-0.995=0.380,按樣本質量計算酶活得:

        PFK活性(U/g 質量)=450×ΔA ÷W=450×0.380 ÷0.1=1710 U/g 質量。

        1. 取0.1g桃葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清之后按照測定步驟操作,測得計算ΔA= A1-A2 = 1.38-1.323=0.057,按樣本質量計算酶活得:

        PFK活性(U/g 質量)=450×ΔA ÷W=450×0.057 ÷0.1=256.5 U/g 質量。
        參考文獻:

        1. Papagianni M, Avramidis N. Lactococcus lactis as a cell factory: a twofold increase in phosphofructokinase activity results in a proportional increase in specific rates of glucose uptake and lactate formation[J]. Enzyme and microbial technology, 2011, 49(2): 197-202.

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