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        • α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
        產品名稱:

        α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-17
        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        α-Amylase(α-AL)Activity Assay Kit(Iodine-starch colorimetry)
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC4575
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途α-淀*酶活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        α-淀*酶(α-AL)活性檢測試劑盒(碘-淀粉比色法)說明書

        微量法

        注意:本產品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC4575

        規(guī)格:100T/48S

        產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前加入6.25 mL試劑三,置于常溫水中并加熱至煮沸,期間不斷攪拌粉劑至溶解,用不完的試劑2-8保存8;

        2、 標準品:10 mg淀粉標準品。臨用前加10 mL試劑三,置沸水浴中振蕩溶解,配成1 mg/mL淀粉標準液,2-8保存四周

        產品說明:

        淀*酶負責水解淀粉,包括α-淀*酶和β-淀*酶。α-淀*酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷鍵,生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖,同時使淀粉的粘度降低,因此又稱為液化酶。

        α-淀*酶催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解,產生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等,碘可以與未被水解的淀粉結合,生成在570nm下有特征吸收峰的復合物,其深淺可計算出淀*酶的活力單位。α-AL耐熱,但是β-淀*酶可在70℃鈍化15min。因此粗酶液經(jīng)過70℃鈍化15min,就只有α-AL能夠催化淀粉水解。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        酶標儀/可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻

        1、組織:稱取約0.1g樣本,加1mL蒸餾水勻漿;勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提?。?/span>6000g,室溫離心10min,吸取上清液即為淀*酶原液。

        2、液體:直接檢測。(若有渾濁則離心后進行測定)

        二、測定步驟

         

         

        1、 分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長到570nm,分光光度計蒸餾水調零。

        2、 將淀粉標準液用蒸餾水稀釋為0.4、0.20.1、0.05、0.025、0.01250.00625mg/mL的標準溶液。

        序號

        稀釋前濃度(mg/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(mg/mL

        1

        1

        200

        300

        0.4

        2

        0.4

        200

        200

        0.2

        3

        0.2

        200

        200

        0.1

        4

        0.1

        200

        200

        0.05

        5

        0.05

        200

        200

        0.025

        6

        0.025

        200

        200

        0.0125

        7

        0.0125

        200

        200

        0.00625

        實驗中每個標準管需100µL標準溶液。

        3、 按操作表依次加入各試劑:

        試劑(μL

        測定管

        對照管

        空白管

        標準管

        標準空白管

        α淀*酶原液

        100

        100

        -

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        100

        -

        100

        標準溶液

        -

        -

        -

        100

        -

        70℃水浴15min左右,冷卻

        試劑一

        100

        -

        100

        -

        -

        蒸餾水

        -

        100

        -

        100

        100

        40℃恒溫水浴中準確保溫10min

        試劑二

        50

        50

        50

        50

        50

        混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中讀取測定管、對照管、空白管、標準管、標準空白管570nm下的吸光度,分別記為A測定、A對照、A空白、A標準和A標準空白,計算ΔA測定=A空白-A測定-A對照),ΔA標準=A標準-A標準空白。標準曲線和標準空白管只需做1-2

        三、α-淀*酶活性計算

        1、標準曲線的繪制:

        根據(jù)標準管的濃度(x,mg/mL)和吸光度ΔA標準(y,ΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,mg/mL)。

        2α-淀*酶活性計算

        1)按照樣本質量計算

        單位定義:每g組織每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活力單位。

        α-淀*酶活性 (U/g 質量)=x×V÷(W×V÷V樣總)÷T=0.1×x÷W

        2)按照蛋白質濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        α-淀*酶活性 (U/mg prot)= x×V÷V×Cpr÷T=0.1×x÷Cpr

        3)按照液體體積計算

        單位定義:每mL液體每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

        α-淀*酶活性 (U/mL)= x×V÷V÷T=0.1×x

        V樣:加入反應體系中樣本體積,0.1mL;V樣總:樣本總體積,1mL; Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,gT:反應時間,10min。

        注意事項:

        吸光值大于1.5或者ΔA大于0.8 時,可以對樣本進行適當稀釋后測定。

        實驗實例:

        1. 取約0.1g藜葉片,加1mL蒸餾水勻漿,勻漿后在室溫下放置提取15min,每隔5min振蕩1次,使其充分提取;6000g,室溫離心10min,吸取上清液,之后按照測定步驟操作,96孔板測得計算ΔA測定=A空白-A測定-A對照)=1.065-0.849-0.220=0.436,帶入標準曲線y=2.628x-0.0051,計算x=0.168,按樣本質量計算酶活得:

        α-淀*酶活性 (U/g 質量)=0.1×x÷W=0.168 U/g 質量。

        相關系列產品:

        BC4580/BC4585  β-淀*酶(β-AL)活性檢測試劑盒(碘-淀粉比色法)

        α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法 α-淀*酶活性檢測試劑盒 微量法

         


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