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        • 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒微量
        產(chǎn)品名稱:

        尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒微量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        中文名稱
        尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒微量
        單位

        英文名稱
        UDP-Glucuronosyltransferase(UDPGT)Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/96S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5815
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDPGT)活性檢測試劑盒說明書微量法

        貨號:BC5815

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體100 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15 mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑二

        液體1.2 mL×1支

        2-8℃保存

        試劑三

        液體1.2 mL×1支

        2-8℃保存

        試劑四

        液體1.2 mL×1支

        2-8℃保存

        試劑五

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑六

        液體12 mL×1瓶

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1支

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑五:臨用前加入0.619mL蒸餾水,-20℃分裝可保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2. 工作液:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑二:試劑三:試劑四=100μL:100μL100μL0.3mL,10T)的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        3. 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL的對硝 基苯*溶 液。臨用前取50μL 5μmol/mL對硝 基苯* 溶液,加入950μL蒸餾水,配制成0.25μmol/mL對硝 基苯*溶 液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(glucuronosyltransferase,UDPGT/UGT,EC 2.4.1.17)是一種結(jié)合在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的膜蛋白,該酶催化葡萄糖醛酸基團(tuán)從供體尿苷二磷酸葡萄糖醛酸(Uridine 5-Diphosphoglucuronic Acid,UDPGA)轉(zhuǎn)移至受體上,受體包括酚類、醇類、胺類和脂肪酸類。葡萄糖醛酸化代謝促進(jìn)了藥物和其他外源物質(zhì)通過腎臟或膽汁的排泄,在生物體內(nèi)代謝、解毒、清除過程中發(fā)揮重要作用。

        UDPGT催化供體尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的葡萄糖醛酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移至對硝 基苯 *,后者在405nm處有特征吸收峰,通過測定吸光值降低速率可計算UDPGT活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

         

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        稱取0.1g樣本,加入1.0 mL提取液,用勻漿器或研缽于冰上勻漿;

        4℃,800g離心10 min,棄沉淀,留上清液,4℃,9000 g離心20 min,棄沉淀,留上清液;

        4℃,12000g離心60 min,棄上清,留沉淀。沉淀中加入0.5 mL提取液重懸,置于冰上待測。

        二、 測定步驟

        1.可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至405nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零;

        2.將試劑一37℃預(yù)熱15min

        3.操作表(在EP管中加入下列試劑):

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        蒸餾水

        -

        -

        50

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        -

        50

        試劑一

        110

        120

        150

        150

        工作液

        30

        30

        -

        -

        試劑五

        10

        -

        -

        -

        混勻,37℃反應(yīng)10min。

        試劑六

        100

        100

        100

        100

        混勻,于4℃,8000g離心10min,取上清液200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,測定405nm處吸光值,分別記為A測定、A對照、A空白和A標(biāo)準(zhǔn),計算ΔA測定=A對照-A測定,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。

        三、UDPGT活性計算

        1. 按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:每mg組織蛋白每min催化消耗1nmol對 硝基 苯*定義為一個酶活單位。

        UDPGT活性(U/mg prot=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn))×V÷Cpr×V樣)×103÷T

        =25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:每g組織每min催化消耗1nmol對硝 基 苯*定義為一個酶活單位。

        UDPGT活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×C標(biāo)準(zhǔn))×V÷W×V÷V樣總)×103÷T

        =12.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        C標(biāo)準(zhǔn):0.25μmol/mL;V樣:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mL;V樣總:重懸沉淀加入提取液的體積,0.5mL;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;103:單位換算系數(shù),1μmol=103nmol;T:反應(yīng)時間,10min

        注意事項:

        1. 如果?A測定小于0.004或測定管吸光值接近對照管,可以增加樣本量或者延長37℃反應(yīng)時間后再進(jìn)行測定;如果?A測定大于0.9,建議將重懸液用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

        實驗實例:

         

        1. 取0.1027g新鮮小鼠肝臟樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,多次離心后加入0.5mL提取液重懸沉淀,按照

        測定步驟操作,用96孔板測得計算:ΔA測定=A對照-A測定=0.970-0.524=0.446,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.533- 0.036=0.497,按樣本質(zhì)量計算得:

        UDPGT活性(U/g 質(zhì)量)=12.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =109.224 U/g 質(zhì)量

        參考文獻(xiàn):

        [1] Visser TJ, Kaptein E, van Raaij JA. et al. Multiple UDP-glucuronyltransferases for the glucuronidation of thyroid hormone with preference for 3,3',5'-triiodothyronine (reverse T3) [J]. Federation of European Biochemical Societies Letters, 1993, 315(1): 65-68.

        [2] Viollon-Abadie C, Lassere D, Debruyne E. et al. Ph eno , beta-naphthoflavone, clofibrate, and pregnenolone- 16alpha-carbonitrile do not affect hepatic thyroid hormone UDP-glucuronosyl transferase activity, and thyroid gland function in mice [J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 1999, 155(1): 1-12.

        [3] Nicod L, Rodriguez S, Letang JM. et al. Antioxidant status, lipid peroxidation, mixed function oxidase and UDP-glucuronyl transferase activities in livers from control and DOCA-salt hypertensive male Sprague Dawley rats [J]. Molecular and Cellular Biochemistry, 2000, 203(1-2): 33-39.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC5170/BC5175 直接膽*素(DBIL)含量檢測試劑盒

        BC5180/BC5185 總膽*素(TBIL)含量檢測試劑盒


         尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒微量 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒微量


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