白蛋白含量檢測試劑盒（溴甲酚紫顯色法）說明書

微量法

貨號：BC5825

規(guī)格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 顯色液：臨用前根據樣本數量按照試劑一：試劑二：試劑三=10μL: 3990μL :40μL（4040μL，20T）的比例配制顯色液，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用；

2、 標準品：10mg/mL白蛋白標準液。臨用前取50μL10mg/mL白蛋白標準液，加入150μL提取液，配制成2.5mg/mL白蛋白標準液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

產品說明：

白蛋白是人體血漿中最主要的蛋白質，由肝臟合成，是人體內一種重要的營養(yǎng)物質，可以維持血漿滲透壓，并可與多種營養(yǎng)物質、激素和藥物相結合。白蛋白含量可以反映機體營養(yǎng)狀態(tài)，也可排查影響肝臟代謝功能的疾病，如肝硬化、肝損傷、營養(yǎng)不良、惡性腫瘤等。

在酸性環(huán)境下，白蛋白分子帶正電荷，與帶負電荷的溴甲酚紫（Bromocresol Purple，BCP）結合生成綠色復合物，在603nm處有特定吸收峰，該復合物吸光值與白蛋白濃度成正比。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織樣本：按質量（g）: 提取液體積（mL）1 : 5~10比例加入提取液（建議稱取0.1g樣本，加入1.0mL提取液），冰浴勻漿后，于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

2. 細菌/細胞樣本：按細菌/細胞數量（10⁶）：提取液體積（mL）5~10: 1的比例加入提取液（建議5百萬細菌/細胞加入1.0mL提取液），冰浴超聲破碎細菌/細胞（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間5min），然后于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。

3. 液體樣本：直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。

二、測定步驟

1．可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至603nm，可見分光光度計蒸餾水調零。

2．操作表：（微量玻璃比色皿/96孔板中加入下列試劑）

三、白蛋白含量計算

1. 按樣本蛋白濃度計算

白蛋白含量（mg/mg prot）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×Cpr）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr

2. 按樣本質量計算

白蛋白含量（mg/g 質量）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（W×V樣÷V樣總）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W

3. 按細菌/細胞數量計算

白蛋白含量（mg/10⁴ cell）=ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×N÷V樣總）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準÷N

4. 按液體體積計算

白蛋白含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 2.5×ΔA測定÷ΔA標準

C標：標準管濃度，2.5mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌/細胞總數，以10⁶計。

注意事項：

1、 如果?A測定小于0.005或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.4，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

2、 如果樣本加入顯色劑后出現(xiàn)渾濁，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。

實驗實例：

1. 取20μL人血清樣本，用提取液稀釋10倍，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.371-0.117=0.254，ΔA標準=A標準-A空白=0.28-0.117=0.163，按液體體積計算得：

白蛋白含量（mg/mL）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準×10 =38.957 mg/mL。

參考文獻：

[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.

[2] Muramoto Y , Matsushita M , Irino T .Reduction of reaction differences between human mercaptalbumin and human nonmercaptalbumin measured by the bromcresol purple method[J].Clinica Chimica Acta, 1999, 289(1-2):69-78.

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