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        • 細(xì)胞銅(Cu)含量檢測試劑盒 離子
        產(chǎn)品名稱:

        細(xì)胞銅(Cu)含量檢測試劑盒 離子

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        細(xì)胞銅(Cu)含量檢測試劑盒 離子
        單位

        英文名稱
        Cell Copper Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5750
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途細(xì)胞銅(Cu)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        細(xì)胞銅Cu含量檢測試劑盒說明書

        可見分光光度

        貨號:BC5750

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體45 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:若有試劑析出,置于37℃水浴溶解即可。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:10mmol/L(即10000nmol/mL硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液。

        3. 20nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品配制:將10000nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水先稀釋為200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,再將200nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液稀釋為20nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液備用,具體稀釋可參考以下:取20µL 10000nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液加入980µL蒸餾水混勻,即為200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品;再吸取100µL 200nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液加入900µL蒸餾水混勻,即為20nmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品。 

        產(chǎn)品說明:

        銅(Cu人體必需的微量元素之一,也是蛋白質(zhì)以及酶的重要組成部分可以存在于紅細(xì)胞的內(nèi)外,主要功能是輔助造血,即催化血紅蛋白的合成。銅元素可以適當(dāng)促進(jìn)人體的骨骼發(fā)育,促進(jìn)人體神經(jīng)系統(tǒng)以及腦部發(fā)育,維持嬰幼兒的正常生長發(fā)育,因此,測定組織內(nèi)銅離子含量可知體內(nèi)是否缺銅。

        酸性條件下,Cu2+從銅藍(lán)蛋白和清蛋白中解離出來,與絡(luò)合劑3,5-二溴-PAESA反應(yīng),產(chǎn)生色絡(luò)合物,580nm處有特征吸收峰在一定范圍內(nèi)吸光度與濃度成正比,從而計算出Cu2+濃度。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        細(xì)胞的處理:收集細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)胞數(shù)量(106個):蒸餾水體積(mL)為5~100.4的比例(建議5萬細(xì)胞加入0.4mL蒸餾水),超聲波破碎細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔7s,3min),然后10000g4,離心10min,取上清置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至580nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 實驗前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預(yù)10min。

         

        3、 操作表(在1.5mLEP管中依次加入以下試劑)

        試劑名稱(μL

        空白

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        蒸餾水

        250

        -

        -

        樣本

        -

        250

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        250

        試劑一

        550

        550

        550

        試劑二

        250

        250

        250

        充分混勻,37℃孵育5min,取反應(yīng)液于1mL玻璃比色皿中,立即測定580nm處吸光值A,記為A空白、A測定、A標(biāo)準(zhǔn),計算ΔA測定=A測定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠?/span>和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。

        三、細(xì)胞銅(Cu含量的計算

        1. 按細(xì)胞數(shù)量計算

        細(xì)胞銅(Cu含量(nmol/106 cell= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V提取÷N =8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

        2. 按蛋白濃度計算:

        細(xì)胞銅(Cu含量(nmol/mg prot= ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn))×V提取÷Cpr×V提取)

        = 20×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        C標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品濃度,20nmol/mL;V提?。?/span>試劑一體積,0.4mL;N:細(xì)胞總數(shù),以百萬計;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL。

        注意事項:

        1. 37℃孵育5min后請立即測定吸光度,若樣本數(shù)量過多,可分批次測定,盡量確保在20min內(nèi)完成測定。

        2. 如果樣本測定吸光值大于0.5,建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測定,注意同步修改計算公式。

        3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值,可適當(dāng)增大樣本量,空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

        實驗實例

        1. 收集約5SHSY5Y細(xì)胞,加入0.4mL蒸餾水,超聲波破碎(功率 200w,超聲3s,間隔7s,3min),10000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.187-0.071=0.116ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.441-0.071=0.370,按細(xì)胞數(shù)量計算含量得:

        細(xì)胞銅含量(nmol/106 cell= 8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N=0.5016 nmol/106 cell。

        2. 收集約5U937細(xì)胞,加入0.4mL蒸餾水超聲波破碎(功率 200w,超聲3s,間隔7s,3min),10000g4℃離心10min,取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.129-0.071=0.058ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.441-0.071=0.370,按細(xì)胞數(shù)量計算含量得:

        細(xì)胞銅含量(nmol/106 cell= 8×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N=0.2508 nmol/106 cell。

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        細(xì)胞銅(Cu)含量檢測試劑盒 離子 細(xì)胞銅(Cu)含量檢測試劑盒 離子

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