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        • 土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-23
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        中文名稱
        土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        單位

        英文名稱
        Soil Acidic xylanase (S-ACX)Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5725
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤酸性木聚糖酶(S-ACX)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        貨號(hào):BC5725

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        緩沖液

        液體35 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體18 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制:臨用前按緩沖液:試劑一= 4mL2mL6mL,約一條標(biāo)曲稀釋用量)的比例進(jìn)行配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg木糖。臨用前加入667μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃保存8周。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        土壤酸性木聚糖酶(Soil acid xylanase, S-ACX),又稱為土壤酸性半纖維素酶,主要分離自最適生長(zhǎng)pH4-5的微生物在酸性環(huán)境中,S-ACX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在540nm處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過(guò)測(cè)定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,可計(jì)算S-ACX活性。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,過(guò)30~50目篩。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋為2、1.5、1.21、0.8、0.4、0.2μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品待測(cè)。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

         

         

        序號(hào)

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL

        稀釋液體積(μL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        100

        100

        900

        10

        2

        10

        200

        800

        2

        3

        10

        150

        850

        1.5

        4

        10

        120

        880

        1.2

        5

        10

        100

        900

        1

        6

        1

        200

        50

        0.8

        7

        1

        100

        150

        0.4

        8

        1

        50

        200

        0.2

        備注:實(shí)驗(yàn)中每管需要150μL。

        4、 樣本測(cè)定(在EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        對(duì)照管

        測(cè)定管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        0.05g

        0.05g

        -

        -

        緩沖液

        200

        200

        -

        -

        試劑一

        -

        100

        -

        -

        渦旋混勻,置于50℃水浴鍋中反應(yīng)2h,立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開(kāi),以免進(jìn)水,改變了反應(yīng)體系),冷卻至室溫。

        -

        -

        試劑一

        100

        -

        -

        -

        常溫,12000g離心10min,取上清

        -

        -

        上清液

        150

        150

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        -

        150

        標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        -

        -

        150

        -

        試劑二

        100

        100

        100

        100

        渦旋混勻,沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開(kāi),以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系),冷卻至室溫后,室溫12000g離心5min,吸取上清液200μL96孔板或微量玻璃比色皿中,測(cè)定各管540nm下的吸光度,分別記為A對(duì)照、A測(cè)定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測(cè)1-2次。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

        三、S-ACX計(jì)算公式

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測(cè)定(yΔA測(cè)定)帶入公式計(jì)算樣本濃度(x,μmol/mL)。

        2. 土壤S-ACX活性計(jì)算:

        酶活定義:50℃,pH 4.8條件下,每克土壤每小時(shí)分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活性單位。

        S-ACX活性(U/g 土樣)=x× V反總÷W÷T×F=0.15×x÷W×F

        V反總:反應(yīng)體系總體積,0.3mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,2hF:稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

         

        1. 若樣本ΔA<0.01,可適當(dāng)增大樣本量或者50℃反應(yīng)時(shí)間后測(cè)定;若樣本ΔA>1.5或者A測(cè)定>1.5時(shí),可用蒸餾水稀釋上清液后測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。

        2. 建議使用螺旋管,防止沸水浴過(guò)程中蓋子爆開(kāi),改變反應(yīng)體系。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.05g野蘑菇土樣,按操作表進(jìn)行第一步反應(yīng)2h后,取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得ΔA測(cè)定=A測(cè)定- A對(duì)照=0.431-0.099=0.332,帶入標(biāo)曲y=0.6582x-0.153 R2=0.999,計(jì)算x=0.737,按樣本質(zhì)量計(jì)算S-ACX活性得:

        S-ACX活性(U/g 土樣)=0.15×x÷W×F =4.422 U/g 土樣。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC5730/BC5735  土壤中性木聚糖酶(S-NEX)活性檢測(cè)試劑盒

        BC5740/BC5745  土壤堿性木聚糖酶(S-BAX)活性檢測(cè)試劑盒

         土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 土壤酸性木聚糖酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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