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        • 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
        單位

        英文名稱
        Soil Acidic xylanase (S-ACX)Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5675
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途組胺含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤酸性木聚糖酶(S-ACX)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC5720

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        緩沖液

        液體40mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體17mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的配制:臨用前按緩沖液:試劑一=4.8mL2.4mL7.2mL,約一條標(biāo)曲稀釋用量)的比例進(jìn)行配制,現(xiàn)配現(xiàn)用。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg木糖。臨用前加入667μL標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃保存8周。

        產(chǎn)品說明:

        土壤酸性木聚糖酶(Soil acid xylanase, S-ACX),又稱為土壤酸性半纖維素酶,主要分離自最適生長pH4-5的微生物。

        在酸性環(huán)境中,S-ACX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng),在540nm處有特征吸收峰,反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率,可計算S-ACX活性。

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品

        可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至540nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液稀釋為1.5、1.2、1、0.8、0.6、0.4μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

         

         

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL

        稀釋液體積(μL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        100

        100

        900

        10

        2

        10

        150

        850

        1.5

        3

        10

        120

        880

        1.2

        4

        10

        150

        1350

        1

        5

        1

        400

        100

        0.8

        6

        1

        300

        200

        0.6

        7

        1

        200

        300

        0.4

        備注:實驗中每管需要300μL

        4、 樣本測定(在EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        對照管

        測定管

        空白管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        樣本

        0.1g

        0.1g

        -

        -

        緩沖液

        400

        400

        -

        -

        試劑一

        -

        200

        -

        -

        渦旋混勻,置于50℃水浴鍋中反應(yīng)2h,立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開,以免進(jìn)水,改變了反應(yīng)體系),冷卻至室溫。

        -

        -

        試劑一

        200

        -

        -

        -

        常溫,12000g離心10min,取上清

        -

        -

        上清液

        300

        300

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

        -

        -

        300


        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        -

        300

        試劑二

        200

        200

        200

        200

        渦旋混勻,沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開,以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系),冷卻至室溫。

        蒸餾水

        500

        500

        500

        500

        充分混勻后,室溫12000g離心5min,取上清液于1mL玻璃比色皿中測定540nm下的吸光度,分別記為A對照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計算ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。每個測定管需設(shè)一個對照管。

        三、S-ACX計算公式

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(yΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(x,μmol/mL)。

        2. 土壤S-ACX活性計算:

        酶活定義:50℃pH 4.8條件下,每克土壤每小時分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活性單位。

        S-ACX活性(U/g 土樣)=x× V反總÷W÷T×F=0.3×x÷W×F

        V反總:反應(yīng)體系總體積,0.6mL;W:樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時間,2h;F:稀釋倍數(shù)。

         

        注意事項:

        1. 若樣本ΔA<0.01,可適當(dāng)增大樣本量或者延長50℃反應(yīng)時間后測定;若樣本ΔA>1.5或者A測定>1.5時,可用蒸餾水稀釋上清液后測定,注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

        2. 建議使用螺旋管,防止沸水浴過程中蓋子爆開,改變反應(yīng)體系。

        實驗實例:

        1、 0.1g森林土樣,按操作表進(jìn)行第一步反應(yīng)2h后,取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.302-0.049=0.253,帶入標(biāo)曲y=0.5374x-0.1048 R2=0.9977),計算x=0.666,按樣本質(zhì)量計算S-ACX活性得:

        S-ACX活性(U/g 土樣)= 0.3×x÷W×F =3.996 U/g 土樣。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC5730/BC5735  土壤中性木聚糖酶(S-NEX)活性檢測試劑盒

        BC5740/BC5745  土壤堿性木聚糖酶(S-BAX)活性檢測試劑盒

         

        土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒

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