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        • 類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒 抗氧
        產(chǎn)品名稱:

        類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒 抗氧

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-23
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒 抗氧
        單位

        英文名稱
        UDP-Flavonoid glycosyltransferase (UFGT) Activity Assay kit
        檢測方法
        紫外分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5660
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT活性檢測試劑盒說明書

        紫外分光光度法

        貨號:BC5660

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        粉劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體70 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體1.5 mL×1

        -20℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑四

        液體150 μL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體60 μL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑七

        粉劑×1

        -20℃保存

        溶液的配制:

        1、 提取液:臨用前將粉劑一倒入提取液中,此溶液為懸濁液,使用前搖勻即可;

        2、 試劑二工作液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二= 855μL:45μL900μL,2T)的比例配制,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用;

        3、 試劑三:臨用前加入30 mL蒸餾水溶解,未用完的試劑分裝保存,-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融;

        4、 試劑六:臨用前加入10 mL蒸餾水溶解,未用完的試劑分裝保存,-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融

        5、 試劑七:試劑放于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中。臨用前加入9 mL蒸餾水溶解未用完的試劑分裝保存,-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融

        6、 工作液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑四:試劑五:試劑六:試劑七=1.4mL5μL2μL0.3 mL0.3 mL2007μL,約2T)的比例配制,充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用。(試劑四、試劑五使用前先將液體離心至底部使用)

        產(chǎn)品說明:

        類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT)是莽草酸途徑的最后一個作用酶,也是使花色素形成穩(wěn)定的花色苷的第一個作用酶,并使其由無色轉(zhuǎn)為有色;UFGT是果實著色過程中的關(guān)鍵酶,它使不穩(wěn)定的花色素轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定的花色苷。

        UFGT催化UDPG與槲皮素生成UDP和槲皮素糖苷;UDP在丙 酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化NADHNAD+NAD+生成速度與UDP含量成正比,通過340nm吸光度下降速度反映UFGT活性。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽/勻漿器、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 加樣表:首先在1.5mLEP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        樣本

        100

        -

        蒸餾水

        -

        100

        試劑二工作液

        450

        450

        試劑三

        450

        450

        混勻,30℃反應(yīng)4h,95℃水浴10 min滅活,冷卻至室溫。10000g 4℃離心5min,取上清液待測。(在此期間將工作液37℃預(yù)熱5min

        上清液

        100

        100

        工作液

        900

        900

           將上清液和工作液分別加入1mL石英比色皿中,立即充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)2min,拿出迅速擦干測定2min10s時的吸光值A2,記錄 340nm 10s時吸光值 A1 2min 后的吸光值 A2。計算A測定=A1測定-A2測定,A空白=A1空白-A2空白,?A =A測定-A空白。空白管只需做1-2次。

        三、類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT活力計算

        1、按照蛋白濃度計算

        單位的定義:每mg組織蛋白每小時催化1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

        UFGT活力(U/mg prot ) = ΔA×V反總II÷ε×d×109÷ Cpr ×V÷V反總I×V上清)÷T×F
        =4019.29×ΔA ÷Cpr×F

        2、按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:每g組織每小時催化1nmol NADH定義為一個酶活力單位。

        UFGT活力(U/g 質(zhì)量) = ΔA×V反總II÷ε×d×109÷W× V÷V樣總÷V反總I×V上清)÷T×F
         =4019.29×ΔA÷W×F

        V反總I30℃第一步反應(yīng)體系總體積V+ V試劑二工作液+V試劑三,1 mL;V反總II37℃第二步反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;εNADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:石英比色皿光徑,1cm;V樣:加

        入樣本體積,0.1mL;V上清:第二步反應(yīng)中上清液體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時間,4hCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;F:稀釋倍數(shù);109:換算系數(shù),1mol=109nmol。

        注意事項:

        1、 如果A1測定<A1空白或者ΔA大于0.5,可以對上清液進行稀釋或者縮短30℃反應(yīng)時間重新測定;?A小于0.005,可以加大樣本量或者延長30℃反應(yīng)反應(yīng)時間重新測定。最終計算時同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1078g洋桔梗,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算A測定=A1測定-A2測定=1.07-1.038=0.032,A空白=A1空白-A2空白=0.823-0.807=0.016,?A =A測定-A空白=0.016。帶入公式計算:

        UFGT活力(U/g 質(zhì)量)= 4019.29×ΔA÷W=596.56 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1133g洋蔥,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL石英比色皿測得計算A測定=A1測定-A2測定=0.838-0.809=0.029,A空白=A1空白-A2空白=0.823-0.807=0.016,?A =A測定-A空白=0.013。帶入公式計算:

        UFGT活力(U/g 質(zhì)量)= 4019.29×ΔA÷W=461.17 U/g 質(zhì)量

        參考文獻:

        [1] Parvaneh, TaherehAbedi, BahramDavarynejad, Gholam HosseinMoghadam, Ebrahim Ganji. Enzyme activity, phenolic and flavonoid compounds in leaves of Iranian red flesh apple culti vars grown on different rootstocks[J]. Scientia horticulturae, 2019, 246.

        [2] Mori K, Sugaya S, Gemma H. Decreased anthocyanin biosynthesis in grape berries grown under elevated night temperature condition[J]. Hort, 2005, 105(3):319-330. 

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1350/BC1355 植物原花青素(OPC)含量檢測試劑盒

        BC4090/BC4095 花青素還原酶(ANR)活性檢測試劑盒

        BC1380/BC1385  植物花色苷含量檢測試劑盒

         

        類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒 抗氧 類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶活性檢測試劑盒 抗氧

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