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        • 游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它
        產(chǎn)品名稱:

        游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-22
        單位

        儲存條件
        2-8℃
        中文名稱
        游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它
        有效期
        6個月
        英文名稱
        Free Hemoglobin ( FHb ) Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5590
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途游離血紅蛋白(FHb)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        游離血紅蛋白(FHb含量檢測試劑盒說明書

        可見分光光度

        貨號:BC5590

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體40mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑二

        液體40mL×1瓶

        2-8℃保存

        試劑三

        液體2mL×1支

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 工作液:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑一:試劑二:試劑三=500μL:500μL25μL1.025mL,約1T)的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        2. 標(biāo)準(zhǔn)品:5mg血紅蛋白,臨用前加入1mL蒸餾水,充分混勻,配制成5mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液,2-8℃可保存4周。

        產(chǎn)品說明:

        血管內(nèi)發(fā)生溶血時,紅細(xì)胞破裂,釋放出血紅蛋白,血漿中游離血紅蛋白(free hemoglobin,FHb)增多。自身免疫性溶血性貧血、鐮刀型細(xì)胞貧血、珠蛋白生成障礙性貧血患者血漿FHb有輕度至中度增加,陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、陣發(fā)性嚴(yán)寒性血紅蛋白尿癥、不穩(wěn)定血紅蛋白病等會出現(xiàn)血尿癥狀。因此,血漿中FHb的測定對于臨床診斷溶血性疾病有重要作用。

        血紅蛋白中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的催化活性,能夠催化過氧化氫氧化4-氨基安*比林和苯胺類似物,生成紫色化合物,其在546nm有特征吸收峰,其顏色深淺與FHb含量成正比。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理

        血漿等液體:直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至546nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將5mg/mL(5000mg/L)血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水進(jìn)行稀釋得到156.25、78.125、39.063、19.531、9.766、4.883mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表:


        序號

        稀釋前濃度(mg/L)

        標(biāo)準(zhǔn)溶液體積(µL)

        蒸餾水體積(µL)

        稀釋后濃度(mg/L)

        1

        5000

        25

        775

        156.25

        2

        156.25

        100

        100

        78.125

        3

        78.125

        100

        100

        39.063

        4

        39.063

        100

        100

        19.531

        5

        19.531

        100

        100

        9.766

        6

        9.766

        100

        100

        4.883

        備注:實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需60µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        4、 將工作液37℃預(yù)熱15min。

        5、 在1mL玻璃比色皿中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(µL)

        空白管

        測定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        蒸餾水

        60

        -

        -

        樣本

        -

        60

        -

        標(biāo)準(zhǔn)溶液

        -

        -

        60

        工作液

        1000

        1000

        1000

        充分混勻,37℃反應(yīng)5min,測定546nm處吸光值A,分別記為A空白、A測定、A標(biāo)準(zhǔn),計算ΔA測定= A測定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A標(biāo)準(zhǔn)-A空白??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)曲線只需測定1-2次。

        、游離血紅蛋白(FHb)含量計算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,mg/L)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)帶入公式計算樣本濃度(xmg/L)。

        2. FHb含量的計算:

        游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F

        F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1. 若測定血漿樣本,采樣和分離血漿過程中避免發(fā)生溶血。

        2. 若樣本測定管吸光值A(chǔ)測定>1,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測定。

        3. 若樣本測定管吸光值A(chǔ)測定<0.01或接近空白管吸光值,建議將樣本加樣量增大后再進(jìn)行測定,空白管和標(biāo)準(zhǔn)管加樣量也需進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。

        實驗實例:

        1. 取60µL兔血清樣本,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白= 0.216-0.064= 0.152,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.007x-0.0075,R2=0.9981。計算x=22.786,計算FHb含量得:

        游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F=22.786 mg/L。

        2. 取60µL馬血清樣本,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白= 0.166-0.064= 0.102,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.007x-0.0075,R2=0.9981。計算x=15.643,計算FHb含量得:

        游離血紅蛋白(FHb)含量(mg/L)=x×F=15.643 mg/L。


        參考文獻(xiàn):

        [1] Reeder B, Svistun enko D, Cooper C, et al. The radical and redox chemistry of myoglobin and hemoglobin: from in vitro studies to human pathology [J]. Antioxid Redox Signal, 2004, 6(6): 954-966.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1730/BC1735  血清鐵濃度檢測試劑盒

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        游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它 游離血紅蛋白(FHb)含量檢測試劑盒 其它


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