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        • 精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-22
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        中文名稱
        精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒
        單位

        英文名稱
        Arginase Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        微量法
        精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5555
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途血T緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        微量法

        貨號(hào):BC5555

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.6 mL×1

        -20℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體4mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體13mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體5.5mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 提取液二和試劑五為易揮發(fā)試劑,用完及時(shí)擰蓋封口。

        2、 提取液的配制:按提取液︰提取液=990µL10µL1T的比例配制,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,禁止將提取液一次性全部加入提取液一中

        3、 試劑一:臨用前加入3.2mL試劑二,充分溶解,請(qǐng)勿放置于-20℃保存。2-8℃可保存4

        4、 標(biāo)準(zhǔn)品:1mol/L(即1000μmol/mL)尿素標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說(shuō)明:

        *酸酶(Arginase)又稱L*酸尿素水解酶或*氨酸脒基水解酶,是一種錳金屬酶。精*酸酶存在于細(xì)菌、酵母、植物、無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物中,并被認(rèn)為最早出現(xiàn)在細(xì)菌中。微生物體內(nèi)的*酸酶其主要功能可能是參與維持L-精*酸的動(dòng)態(tài)平衡,并參與調(diào)控多種重要代謝過(guò)程。

        *酸酶將L-精*(L-arginine)分解為L-鳥(niǎo)*酸(L-ornithine)和尿素(urea),尿素與α-異亞硝基*丙酮反應(yīng)生成560nm處存在吸收峰的衍生物,通過(guò)測(cè)定尿素的生成量,可計(jì)算得到*酸酶活性大小。


        需自備的儀器和用品:

        可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

         

         

        1、 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2、 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測(cè)。。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至560nm,可見(jiàn)分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水分別稀釋為50、2512.5、6.253.125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

        序號(hào)

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        1000

        100

        1900

        50

        2

        50

        500

        500

        25

        3

        25

        500

        500

        12.5

        4

        12.5

        500

        500

        6.25

        5

        6.25

        500

        500

        3.125

        實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需48µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        4、在1.5mLEP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        標(biāo)準(zhǔn)空白管

        48

        48

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        48

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        48

        試劑一

        24

        24

        24

        24

        試劑三

        72

        72

        72

        72

        試劑四

        -

        96

        96

        96

        37℃避光反應(yīng)30min

        試劑四

        96

        -

        -

        -

        8000g 常溫離心5min,另取一支1.5mLEP,吸取200μL上清液于EP管中

        上清液

        200

        200

        200

        200

        試劑五

        40

        40

        40

        40

        沸水浴避光反應(yīng)40min,冰水冷卻,8000g 常溫離心5min,吸取上清200μL上清液于微量玻璃比色皿/96孔板中,測(cè)定在560nm處的吸光度,記作A測(cè)定A對(duì)照,A標(biāo)準(zhǔn),A標(biāo)準(zhǔn)空白。?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次,每個(gè)測(cè)定管需設(shè)置一個(gè)對(duì)照管。)

        三、精*酸酶活性計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(xμmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,ΔA測(cè)定代入方程得到xμmol/mL。

         

         

         

         

        2. 精*酸酶活計(jì)算

        (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:37℃mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol尿素定義為一個(gè)酶活力單位。

        精*酸酶活性(U/mg prot=x×V÷Cpr×V÷T×F= x÷30÷Cpr×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:37℃g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol尿素定義為一個(gè)酶活力單位。

        精*酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x×V÷W÷V樣總×V÷T×F= x÷30÷W×F

        (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)目計(jì)算

        單位的定義:37℃106個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol尿素義為一個(gè)酶活力單位。

        精*酶活性(U/106 cell= x×V÷N÷V樣總×V÷T×F= x÷30÷N×F

        V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.048mLV樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)目,以106計(jì); F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

        1、 如果測(cè)定吸光值大于1.5?測(cè)定大于0.7,可以對(duì)樣進(jìn)行稀釋或者縮短第一步37℃反應(yīng)時(shí)間;測(cè)定吸光值或?測(cè)定過(guò)小,可以加大樣量或者延長(zhǎng)第一步37℃反應(yīng)時(shí)間。最終計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 稱取0.1198g小鼠腎臟組織,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.425-0.102=0.323,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0168x-0.0541R2 = 0.9941x=22.446 μmol/mL,帶入公式計(jì)算:

        精*酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x÷30÷W×F =6.245 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.0989g胡蘿卜,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)得計(jì)算?測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.086-0.063=0.023,帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.0168x-0.0541R2 = 0.9941x=4.5893 μmol/mL,帶入公式計(jì)算:

        *酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x÷30÷W×F=1.547 U/g 質(zhì)量

        參考文獻(xiàn):

        [1] Chen H, Mccaig B C, Melotto M, et al. Regulation of Plant Arginase by Wounding, Jasmonate, and the Phytotoxin Coronatine[J]. Journal of Biological Chemistry, 2004, 279(44):45998-46007.

        [2] Ishii N, Ikenaga H, Carmines P K, et al. High glucose augments arginase activity and nitric oxide production in the renal cortex[J]. Metabolism, 2004, 53(7):868-874.

        [3] Zharikov S, Krotova K, Hu H, et al. Uric acid decreases NO production and increases arginase activity in cultured pulmonary artery endothelial cells[J]. American Physiological Society, 2008(5). 

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1500/BC1505 植物硝態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒

        BC1520/BC1525 植物氨態(tài)氮含量檢測(cè)試劑盒

        BC1530/BC1535 尿素氮(BUN)含量檢測(cè)試劑盒

        BC4370/BC4375 植物中酰脲含量檢測(cè)試劑盒

         

         精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法 精*酸酶活性檢測(cè)試劑盒 微量法


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