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        • 精*酸酶活性檢測試劑盒 常量
        產(chǎn)品名稱:

        精*酸酶活性檢測試劑盒 常量

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-22
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        精*酸酶活性檢測試劑盒
        單位

        英文名稱
        Arginase Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法
        精*酸酶活性檢測試劑盒 常量
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5550
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途血T緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        *精*酸酶活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC5550

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體0.3 mL×1

        -20℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體10mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體36mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 提取液二和試劑五為易揮發(fā)試劑,用完及時擰蓋封口。

        2. 提取液的配制:按提取液︰提取液=990µL10µL1T的比例配制,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,禁止將提取液一次性全部加入提取液中。

        3. 試劑一:臨用前加入9.6mL試劑二,充分溶解,請勿放置于-20℃保存。2-8℃可保存4周。

        4. 標準品:1mol/L(即1000μmol/mL)尿素標準液。

        產(chǎn)品說明:

        精*酸酶(Arginase)又稱L-精*酸尿素水解酶或L-精*酸脒基水解酶,是一種錳金屬酶。*酸酶存在于細菌、酵母、植物、無脊椎動物和脊椎動物中,并被認為最早出現(xiàn)在細菌中。微生物體內(nèi)的精*酸酶其主要功能可能是參與維持L-*的動態(tài)平衡,并參與調(diào)控多種重要代謝過程。

        精*酸酶將L-*酸(L-arginine)分解為L-鳥*酸(L-ornithine)和尿素(urea),尿素與α-異亞硝基苯*酮反應(yīng)生成560nm處存在吸收峰的衍生物,通過測定尿素的生成量,可計算得到精*酸活性大小。


        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

         

        1、 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),

        進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

        2、 細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);12000g 4℃離心20min,取上清,置冰上待測。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至560nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標準溶液的制備:將標準品用蒸餾水分別稀釋為50、2512.5、6.253.125 μmol/mL的標準溶液。

        3、 標準品稀釋表

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        1000

        100

        1900

        50

        2

        50

        500

        500

        25

        3

        25

        500

        500

        12.5

        4

        12.5

        500

        500

        6.25

        5

        6.25

        500

        500

        3.125

        實驗中每個標準管需240µL標準溶液。

        4、在1.5mLEP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標準管

        標準空白管

        樣本

        240

        240

        -

        -

        標準品

        -

        -

        240

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        240

        試劑一

        120

        120

        120

        120

        試劑三

        360

        360

        360

        360

        試劑四

        -

        480

        480

        480

        37℃避光反應(yīng)30min

        試劑四

        480

        -

        -

        -

        8000g 常溫離心5min,另取一支1.5mLEP,吸取1000μL上清液于EP管中

        上清液

        1000

        1000

        1000

        1000

        試劑五

        200

        200

        200

        200

        沸水浴避光反應(yīng)40min,冰水冷卻,8000g 常溫離心5min,吸取上清于比色皿中,測定在560nm處的吸光度,記作A測定A對照,A標準,A標準空白。?A測定=A測定-A對照,?A標準=A標準-A標準空白。(標準管和標準空白管只需做1-2次,每個測定管需設(shè)置一個對照管。)

        三、精*酸酶活性計算

        1. 標準曲線的繪制:

        根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準yΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,ΔA測定代入方程得到xμmol/mL。

        2. 精氨*酶活計算

        (1) 按樣本蛋白濃度計算

         

         

         

        單位的定義:37℃mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 尿素定義為一個酶活力單位。

        精*酶活性(U/mg prot=x×V÷Cpr×V÷T×F= x÷30÷Cpr×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:37℃g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol尿素定義為一個酶活力單位。

        精*酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x×V÷W÷V樣總×V÷T×F= x÷30÷W×F

        (3) 按細菌或細胞數(shù)目計算

        單位的定義:37℃106個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol尿素義為一個酶活力單位。

        精*酸酶活性(U/106 cell= x×V÷N÷V樣總×V÷T×F= x÷30÷N×F

        V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.24mL;V樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,30min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,gN:細胞或細菌數(shù)目,以106計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1、 如果測定吸光值大于1.5?測定大于1,可以對樣本進行稀釋或者縮短第一步37℃反應(yīng)時間;測定吸光值或?測定過小,可以加大樣本量或者延長第一步37℃反應(yīng)時間。最終計算時同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1198g小鼠腎臟組織,加入提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.740-0.033=0.707,帶入標準曲線y=0.0225x-0.0295R2=0.9966,x=32.733μmol/mL帶入公式計算:

        精*酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x÷30÷W×F =9.108U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.0989g胡蘿卜,加入提取液進行冰浴勻漿按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.109-0.013=0.096,帶入標準曲線y=0.0225x-0.0295R2=0.9966x=5.578μmol/mL,帶入公式計算:

        精*酸酶活性(U/g 質(zhì)量)= x÷30÷W×F =1.880 U/g 質(zhì)量

        參考文獻:

        [1] Chen H, Mccaig B C, Melotto M, et al. Regulation of Plant Arginase by Wounding, Jasmonate, and the Phytotoxin Coronatine[J]. Journal of Biological Chemistry, 2004, 279(44):45998-46007.

        [2] Ishii N, Ikenaga H, Carmines P K, et al. High glucose augments arginase activity and nitric oxide production in the renal cortex[J]. Metabolism, 2004, 53(7):868-874.

        [3] Zharikov S, Krotova K, Hu H, et al. Uric acid decreases NO production and increases arginase activity in cultured pulmonary artery endothelial cells[J]. American Physiological Society, 2008(5). 

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC1500/BC1505 植物硝態(tài)氮含量檢測試劑盒

        BC1520/BC1525 植物氨態(tài)氮含量檢測試劑盒

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         精*酸酶活性檢測試劑盒 常量 精*酸酶活性檢測試劑盒 常量

         

         


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