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        • 線粒體乙醛脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        線粒體乙醛脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        線粒體乙醛脫氫酶活性檢測試劑盒 微量法
        單位

        推薦
        若使用96孔板測定,需使用96孔UV板,推薦貨號YA0602
        英文名稱
        Mitochondrial Aldehyde Dehydrogenase (ALDH2) Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5515
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途線粒體乙醛脫氫酶(ALDH2)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        線粒體乙醛脫氫酶(ALDH2)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5515

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑三

        液體0.5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體2.8 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前取一支試劑二加入1.5mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復凍融

        2、 試劑:沸點低,在使用時保持低溫以保證正確的吸取量。用后及時封口。

        3、 工作液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑:試劑=110µL20µL4µL6µL20µL160µL1T的比例配制工作液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        產(chǎn)品說明:

        線粒體乙醛脫氫酶aldehyde dehydrogenase 2ALDH2屬于乙醛脫氫酶蛋白家族,存在于很多組織,特別是肝臟組織內(nèi)含量較高。該酶主要參與乙醇代謝過程的第二步,在線粒體內(nèi)將乙醛氧化成羧酸,然后進入三羧酸循環(huán),被分解,解除乙醛對生物體的毒害作用。另外,ALDH2也可作為酯酶參與硝酸*油的代謝途徑,是硝酸*油重要的生物活性劑。

        ALDH2催化乙醛和NAD+轉(zhuǎn)化為乙酸和NADH,利用NADH340nm處吸光值的變化即可計算得到ALDH2的活性。

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1. 稱取約0.1g組織或收集500萬細胞,加入1mL提取液,在冰上用勻漿器或研缽進行快速勻漿(勻漿器可上下研磨30次左右)。

         

        2. 4℃ 600 g離心10min如需獲得純度更高的線粒體,可將此步離心速度改為1000g。

        3. 將上清液移至另一離心管中,4℃ 11000 g離心15min,棄上清,留沉淀。

        4. 在沉淀中加入400μL提取液,超聲波破碎(功率200W,超聲5秒,間隔10秒,重復15次),用于ALDH2活性測定,若用蛋白濃度計算,取20μL用于蛋白含量測定。

        二、測定步驟

        1、 紫外分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,紫外分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2、 工作液37預熱10min。

        3、 操作表:

        試劑名稱(µL

        空白管

        測定管

        樣本

        -

        40

        蒸餾水

        40

        -

        工作液

        160

        160

        在微量石英比色皿/96UV板中分別加入上述試劑,充分混勻后于340nm處測定1min時的吸光值A1,迅速置于37水浴或培養(yǎng)箱30min(酶標儀有控溫功能可將溫度調(diào)至37),拿出迅速擦干測定31min時的吸光值A2,計算ΔA測定=A2測定-A1測定,ΔA空白=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定-ΔA空白??瞻坠苤恍枳?/span>1-2次。

        三、ALDH2酶活計算

        A 按微量石英比色皿計算:

        1. 按蛋白濃度計算

        酶活定義:每毫克蛋白每分鐘生成1nmolNADH定義為1個酶活單位。

        ALDH2活性U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T×F=26.795×ΔA÷Cpr×F

        2. 按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:每克樣本每分鐘生成1nmolNADH定義為1個酶活單位。

        ALDH2活性U/g 質(zhì)量)=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×W÷V樣總)÷T×F =10.718×ΔA÷W×F

        3. 細胞數(shù)量計算

        酶活定義:每106個細胞每分鐘生成1nmolNADH定義為1個酶活單位。

        ALDH2活性U/106 cell=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V÷V樣總×N÷T×F =10.718×ΔA÷N×F

        εNADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4L;V樣:反應(yīng)體系中加入樣本上清體積,0.04mL;V樣總:線粒體沉淀中加入提取液體積,0.4mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL,需自行測定;W:樣本質(zhì)量,g;N:細胞總數(shù),以106計;T:反應(yīng)時間,30min;109:單位換算系數(shù),1mol=109nmol;F:稀釋倍數(shù)。

        B 96UV板計算:

        將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm96UV板光徑)進行計算即可。

        注意事項:

        1、 試劑四有毒性,實驗過程中,請佩戴好防護用具。

        2、 由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量(單獨測量)。

        3、 樣本ΔA大于1時,建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時,可以延長反應(yīng)時間(60min或更長)來測定。計算時注意同步更改計算公式。

        實驗實例:

        1、 0.1067g小鼠肝臟進行樣本處理用提取液稀釋4倍后,按照測定步驟操作,用96UV板測得計算ΔA測定=A2測定-A1測定=0.743-0.169=0.574,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.102-0.102=0,ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.574-0=0.574,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        ALDH2活性U/g質(zhì)量)=0.574÷6.22×103×0.6×109×2×10-4÷0.04×0.1067÷0.4÷30×4=384.388 U/g質(zhì)量。

        2、 0.1069g冬棗果肉進行樣本處理,按照測定步驟操作,用96UV板測得計算ΔA測定=A2測定-A1=0.177-0.119=0.058,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.102-0.102=0,ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.058-0=0.058,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        ALDH2活性U/g質(zhì)量)=0.058÷6.22×103×0.6×109×2×10-4÷0.04×0.1069÷0.4÷30=9.692 U/g質(zhì)量。

        3、 8×106細胞進行樣本處理,按照測定步驟操作,用96UV板測得計算ΔA測定=A2測定-A1=0.160-0.109=0.051,ΔA空白=A2空白-A1空白=0.102-0.102=0ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.051-0=0.051,按細胞數(shù)量計算酶活得:

        ALDH2活性U/106 cell=0.051÷6.22×103×0.6×109×2×10-4÷0.04×8÷0.4÷30=0.114 U/106 cell。

        參考文獻:

        [1] Feng Liu, Xiangqin Cui, Harry Horner, et al. Mitochondrial aldehyde dehydrogenase activity is required for male fertility in maize. The Plant Cell. May 2001, 13:1063-1078

        [2] Ying Hu, Jinbin Yin, Mingzhi Zheng, et al. Mitochondrial aldehyde dehydrogenase activity protects against lipopolysaccharideinduced cardiac dysfunction in rats. Molecular Medicine Reports. February 2015, 11:1509-1515

        [3] Amit Joshi, Lauren Wassenhove, Kelsey Logas, et al. Aldehyde dehydrogenase 2 activity and aldehydic load contribute to neuroinflammation and Alzheimer’s disease related pathology. Acta Neuropathologica Communications. December 2019, 7:190

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

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