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        • 土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        單位

        中文名稱
        土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        英文名稱
        Soil Pyruvate ( S-PA ) Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5535
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途土壤丙酮酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤丙酮酸(S-PA含量檢測試劑盒(酶法)說明書

                                                       微量法

        貨號:BC5535

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體25mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體13μL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體4 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入3.6mL蒸餾水充分溶解,分裝保存,-20℃可以保存4,避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑三:臨用前按試劑三:蒸餾水=1μL100μL(共101μL,約6T)的比例進行稀釋,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品:20μmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝,起著重要的樞紐作用。

        pH=7.5時,丙酮酸在LDH的催化作用下與NADH反應(yīng),生成NAD +和乳酸。在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應(yīng),產(chǎn)生水溶性Formazan。通過檢測450nm條件下吸光值,可以計算出丙酮酸含量。

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、超聲清洗儀、30-50目篩和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干,過30~50目篩。

        稱取風(fēng)干混勻土樣約0.1g,加入1mL蒸餾水混勻;然后置于超聲清洗儀常溫超聲30min。然后12000g,常溫離心10min,取上清液待測。

        二、測定步驟

        1、 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、 試劑一37℃至少預(yù)熱20min

         

        3、 標(biāo)準(zhǔn)品的制備:將20μmol/mL丙酮酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋得到0.6250.5、0.3125、0.250.15625、0.125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

        4、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表:

        序號

        稀釋前濃度μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        20

        50

        950

        1

        2

        1

        625

        375

        0.625

        3

        0.625

        800

        200

        0.5

        4

        0.5

        625

        375

        0.3125

        5

        0.3125

        800

        200

        0.25

        6

        0.25

        625

        375

        0.15625

        7

        0.15625

        800

        200

        0.125

        實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需20µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        5、 操作表:

        試劑名稱(µL

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管1

        空白管2

        上清液

        20

        20

        -

        -


        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        20

        -


        蒸餾水

        -

        -

        -

        20

        40

        試劑一

        155

        180

        155

        155

        155

        試劑二

        10

        -

        10

        10

        10

        試劑三

        15

        -

        15

        15

        15

        混勻后37℃反應(yīng)30min

        試劑四

        20

        20

        20

        20

        -

        混勻后37℃避光反應(yīng)30min。吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中,測定450nm下的吸光度,計算       ΔA測定=A空白1- A空白2-A測定-A對照),ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A空白1-A標(biāo)準(zhǔn)。(標(biāo)準(zhǔn)曲線、空白管1、空白管2只需測1-2次即可)

        三、土壤丙酮酸含量計算

        1、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,ΔA測定代入方程得到xμmol/mL。

        2、土壤丙酮酸含量計算:

        土壤丙酮酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= x×V÷(V÷V×W) = x÷W

        V樣:加入的樣本體積,0.02mL;V提:前處理中加入蒸餾水的體積,1mL;W:樣本質(zhì)量,g

        注意事項:

        1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。

        實驗實例:

        1、 稱取約0.103g花盆土,加入1mL蒸餾水,超聲破碎30min,10000g,常溫離心10min,取上清待測。之后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定=A空白1- A空白2-A測定-A對照=0.601-0.048-0.455-0.067=0.165,標(biāo)曲y=0.8017x-0.0471,R2=0.9985,x=0.265µmol/mL, 計算土壤丙酮酸含量得: 

        土壤丙酮酸含量(µmol/g 質(zhì)量)= x×V÷(V÷V×W) = x÷W =2.573µmol/g 質(zhì)量。

        2、 稱取約0.101g污泥,加入1mL蒸餾水,超聲破碎30min,10000g,常溫離心10min,取上清待測。之后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算ΔA測定=A空白1- A空白2-A測定-A對照=0.601-0.048-0.331-0.07=0.292,標(biāo)曲y=0.8017x-0.0471,R2=0.9983,x=0.423µmol/mL, 計算土壤丙酮酸含量得:

        丙酮酸含量(µmol/g 質(zhì)量)= x×V÷(V÷V×W) = x÷W =4.188µmol/g 質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC5260/BC5265  丙酮酸(PA)含量檢測試劑盒

        BC0380/BC0385  丙酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

        BC0710/BC0715  α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

        BC0950/BC0955  琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

        土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法 土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法



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