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        • 磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 其它
        產(chǎn)品名稱:

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 其它

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        中文名稱
        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 其它
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Phosphotransacetylase(PTA)Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5460
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號BC546

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體40 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        粉劑×2

        -20保存

        溶液的配制:

        1. 試劑臨用前取1支試劑四加入1.5 mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20分裝保存2周,避免反復(fù)凍融(1支試劑四溶解后可做30S,為了延長試劑盒使用時間,此產(chǎn)品多給1支粉劑)。

        產(chǎn)品說明

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(Phosphotransacetylase,PTA,EC 2.3.1.8)是與乙酸代謝相關(guān)的關(guān)鍵酶之一,乙酸在乙酸激酶和磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶的作用下生成乙酰輔*A,以此來連接糖類、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化。

        PTA催化乙酰輔*A和無機(jī)磷反應(yīng)生成輔*和乙酰磷酸,該反應(yīng)促使DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,其在412nm處有特征吸收峰。


        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器用品:

        可見分光光度計(jì)、分析天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm,4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2. 細(xì)菌/細(xì)胞:按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3秒,間隔7秒,總時間5min);然后12000rpm,4℃離心10min,取上清置于冰上待測。

         

        、測定步驟

        1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑一于25℃預(yù)熱10min左右。

        3. 操作表:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        試劑

        600

        650

        試劑

        50

        50

        試劑

        50

        50

        樣本

        250

        250

        試劑

        50

        -

        將上述試劑按順序加入1mL玻璃比色皿中,充分吸打混勻,記錄412nm波長下15秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入25℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘;迅速取出比色皿并擦干,記錄412nm波長下215秒時的吸光度A2,并計(jì)算ΔA測定=A2測定-A1測定,ΔA對照=A2對照-A1對照,ΔA=ΔA測定-ΔA對照。每個測定管需設(shè)置一個對照管。

        、磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA活性計(jì)算

        1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:25℃下每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總÷Cpr×V樣本)÷T=147.059×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:25℃下每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/g 質(zhì)量=ΔA÷ε×d×V反總÷W×V樣本÷V提?。?/span>÷T=147.059×ΔA÷W

        3. 細(xì)菌/細(xì)胞計(jì)算

        單位的定義:25℃下每106細(xì)菌/細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/106 cell=ΔA÷ε×d×V反總÷N×V樣本÷V提取)÷T=147.059×ΔA÷N

        εTNB摩爾消光系數(shù),13.6×10-3mL/(nmol·cm)d:比色皿光徑,1cmV反總:反應(yīng)體系總體積,1mLV樣本:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.25mLV提取加入提取液的體積,1mL;T:反應(yīng)時間,2min;Cpr樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,gN:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),106計(jì)。

        注意事項(xiàng):

        1. 測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失效

        2. 最好兩個人同時做此實(shí)驗(yàn),一個人比色,一個人計(jì)時,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        3. 樣本較多時,可根據(jù)樣本數(shù)量按操作表配制工作液(試劑一、二、三),因通過單位時間內(nèi)吸光值變化計(jì)算酶活,不推薦同時測多個樣本。

        4. 如果樣本ΔA過低,可適當(dāng)加大樣本量后重新測定;如果樣本ΔA大于0.6,建議將樣本用提取液適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定。注意同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1099g成熟黃桃果肉樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計(jì)算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.105-0.069=0.036ΔA對照=A2對照-A1對照=0.062-0.060 =0.002ΔA=ΔA測定-ΔA對照=0.036-0.002=0.034,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        PTA活性U/g 質(zhì)量)=147.059×ΔA÷W= 147.059×0.034÷0.1099=45.496 U/g 質(zhì)量。

        2. 5.76×106個細(xì)胞,加入0.8mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃玻璃比色皿測得計(jì)算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.188-0.116=0.072,ΔA對照=A2對照-A1對照=0.131-0.087=0.044ΔA=ΔA測定-ΔA對照=0.072-0.044=0.028,按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活得:

        PTA活性U/106 cell=0.028÷13.6×10-3×1×1÷5.76×0.25÷0.8÷2=0.572 U/106 cell

        參考文獻(xiàn):

        [1] Michael M, Karin B, Wolfgang S, et al. Isolation and properties of acetate kinase- and phosphotransacetylase- negative mutants of Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus [J]. Microbiology, 1995, 141(11): 2891-2896.

        [2] Miyake M, Kataoka K, Shirai M, et al. Control of poly-beta-hydroxybutyrate synthase mediated by acetyl phosphate in cyanobacteria[J]. Journal of Bacteriology, 1997, 179(16): 009-5013.

        [3] Bock AK, Glasemacher J, Schmidt R, et al. Purification and characterization of two extremely thermostable enzymes, phosphate acetyltransferase and acetate kinase, from the hyperthermophilic eubacterium Thermotoga maritima[J]. Journal of Bacteriology, 1999, 181(6): 1861-1867.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC6020/BC6025 乙酰輔*A羧化酶(ACC)活性檢測試劑盒(酶法)

        BC0980/BC0985 乙酰輔*A含量檢測試劑盒

        BC3170/BC3175 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 其它 磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 其它

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