亚洲AV无码久久,久草精品首页,97精品资源,九一福利区,三级三级三级日本99

  • <style id="ldh3x"></style>
        歡迎光臨北京索萊寶科技有限公司網(wǎng)站!
        銷售咨詢熱線:
        17801761073
        您的位置: 網(wǎng)站首頁 > 產(chǎn)品中心 > 生化檢測試劑盒-微量法 > 微量法生化試劑盒 > BC5465-100T/48S磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒
        • 磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        中文名稱
        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        英文名稱
        Phosphotransacetylase(PTA)Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5465
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號BC5465

        規(guī)格100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體15 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體1.2 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        液體1.3 mL×1

        2-8℃保存

        試劑

        粉劑×2

        -20保存

        溶液的配制:

        1. 試劑臨用前取1支試劑四,加入0.6 mL蒸餾水充分溶解,未用完的試劑-20分裝保存2周,避免反復(fù)凍融(1支試劑四溶解后可做60S,為了延長試劑盒使用時間,此產(chǎn)品多給1支粉劑)。

        產(chǎn)品說明

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(Phosphotransacetylase,PTA,EC 2.3.1.8)是與乙酸代謝相關(guān)的關(guān)鍵酶之一,乙酸在乙酸激酶和磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶的作用下生成乙酰輔*A,以此來連接糖類、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化。PTA催化乙酰輔*A和無機磷反應(yīng)生成輔*A和乙酰磷酸,該反應(yīng)促使DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,其在412nm處有特征吸收峰

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、分析天平、低溫離心機、水浴鍋、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、可調(diào)節(jié)移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸餾水。

        操作步驟

        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿。12000rpm,4℃離心10min,取上清置冰上待測。

        2. 細(xì)菌/細(xì)胞:按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎(功率200W,超聲3秒,間隔7秒,總時間5min);然后12000rpm,4℃離心10min,取上清置于冰上待測。

         

        、測定步驟

        1. 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,分光光度計蒸餾水調(diào)零。

        2. 試劑一于25℃預(yù)熱10min左右。

        3. 操作表:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        試劑

        120

        130

        試劑

        10

        10

        試劑

        10

        10

        樣本

        50

        50

        試劑

        10

        -

        將上述試劑按順序加入微量玻璃比色皿/96孔板中,充分吸打混勻,記錄412nm波長下15秒時的初始吸光度A1,比色后迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入25℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘(若酶標(biāo)儀帶有控溫功能,將溫度調(diào)至25℃);迅速取出比色皿并擦干,記錄412nm波長下215秒時的吸光度A2,并計算ΔA測定=A2測定-A1測定,ΔA對照=A2對照-A1對照,ΔA=ΔA測定-ΔA對照。每個測定管需設(shè)置一個對照管。

        、磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA活性計算

        1. 使用微量玻璃比色皿測定

        1按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:25℃下每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/mg prot=ΔA÷ε×d×V反總÷Cpr×V樣本)÷T=147.059×ΔA÷Cpr

        2 按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:25℃下每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/g 質(zhì)量=ΔA÷ε×d×V反總÷W×V樣本÷V提取)÷T=147.059×ΔA÷W

        3 細(xì)菌/細(xì)胞計算

        單位的定義:25℃下每106細(xì)菌/細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB定義為一個酶活力單位。

        PTA活性U/106 cell=ΔA÷ε×d×V反總÷N×V樣本÷V提取)÷T=147.059×ΔA÷N

        εTNB摩爾消光系數(shù),13.6×10-3mL/(nmol·cm);d:比色皿光徑,1cm;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.2mL; V樣本:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mL;V提取加入提取液的體積,1mL;T:反應(yīng)時間,2min;Cpr樣本蛋白濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),106

        2. 使用96孔板測定:

        將上述公式中的d=1cm改為d=0.6cm96孔板光徑)進(jìn)行計算即可。

        注意事項:

        1. 測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置,以免變性和失效。

        2. 最好兩個人同時做此實驗,一個人比色,一個人計時,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

        3. 樣本較多時,可根據(jù)樣本數(shù)量按操作表配制工作液(試劑一、二、三),因通過單位時間內(nèi)吸光值變化計算酶活,不推薦同時測多個樣本。

        4. 如果樣本ΔA過低,可適當(dāng)加大樣本量后重新測定;如果樣本ΔA大于0.6(微量比色皿)或者0.496孔板),建議將樣本用提取液適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式

         

        實驗實例:

        1. 0.1056g成熟梨果肉樣本,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用微量玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.1013-0.0620=0.0393,ΔA對照=A2對照-A1對照=0.0571- 0.0558=0.0013ΔA=ΔA測定-ΔA對照=0.0393-0.0013=0.0380,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        PTA活性U/g 質(zhì)量)=147.059×ΔA÷W= 147.059×0.0380÷0.1056=52.919 U/g 質(zhì)量。

        2. 5.76×106細(xì)胞,加入0.8mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,離心后取上清,按照測定步驟操作,用微量玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A2測定-A1測定=0.2411-0.1402=0.1009,ΔA對照=A2對照-A1對照=0.1775-0.1037= 0.0738,ΔA=ΔA測定-ΔA對照=0.1009-0.0738=0.0271,按細(xì)胞數(shù)量計算酶活得:

        PTA活性U/106 cell=0.0271÷13.6×10-3×1×0.2÷5.76×0.05÷0.8÷2=0.554 U/106 cell。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Michael M, Karin B, Wolfgang S, et al. Isolation and properties of acetate kinase- and phosphotransacetylase- negative mutants of Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus [J]. Microbiology, 1995, 141(11): 2891-2896.

        [2] Miyake M, Kataoka K, Shirai M, et al. Control of poly-beta-hydroxybutyrate synthase mediated by acetyl phosphate in cyanobacteria[J]. Journal of Bacteriology, 1997, 179(16): 009-5013.

        [3] Bock AK, Glasemacher J, Schmidt R, et al. Purification and characterization of two extremely thermostable enzymes, phosphate acetyltransferase and acetate kinase, from the hyperthermophilic eubacterium Thermotoga maritima[J]. Journal of Bacteriology, 1999, 181(6): 1861-1867.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC6020/BC6025 乙酰輔*A羧化酶(ACC)活性檢測試劑盒(酶法)

        BC0980/BC0985 乙酰輔*A含量檢測試劑盒

        BC3170/BC3175 乙酸激酶(ACK)活性檢測試劑盒

        磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒 磷酸轉(zhuǎn)乙酰酶(PTA)活性檢測試劑盒

        留言框

        • 產(chǎn)品:

        • 您的單位:

        • 您的姓名:

        • 聯(lián)系電話:

        • 常用郵箱:

        • 省份:

        • 詳細(xì)地址:

        • 補充說明:

        • 驗證碼:

          請輸入計算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7
        欧美中文字幕| 国产精品无码久久久久久久久| 日韩操女人| 超碰在线免费97| 海外av在线| 国产在线婷婷| 91在线超碰| 中文字幕无码人妻在线视频| 五月婷婷网| 亚洲AV无码五区六区七区八区| 日韩无码小说| 欧美三级韩国三级少妇99| 新营市| 欧美一区在线看| 国产成人天天爽高清视频| 精品无码人妻一区| 超碰免费成人在线| 超碰人人弄| 无码中文字幕| 欧美性爱在线观看| 一本一道久久a久久无码 | 影音先锋中文字幕人妻| 黄色动漫在线免费看| 人人操人人射人人舔| 日韩成人小说| 五月天精品一区二区三区| 超碰精品| 无码国产精品人妻一区二区| 太白县| 色婷婷精品视频| 人妻无码久久综合| 女人高潮特级毛片免费看| 丁香五月成人网| 日韩中文字幕av| 久久久人妻一区二区三区| 欧美成人精品A片人妻| 亚洲色婷婷综合久久久中文 | 国产一级黄| 五月天激情国产综合婷婷| 颜射在线观看| 久久思思热|