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        • ATP含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        ATP含量檢測(cè)試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        中文名稱
        ATP含量檢測(cè)試劑盒 微量法
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        ATP Content Assay Kit(WST-1 Method)
        檢測(cè)方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5475
        規(guī)格100T/96S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途ATP含量檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        ATP含量檢測(cè)試劑盒(WST顯色法)說明書

        微量法

        貨號(hào):BC5475

        規(guī)格:100T/96S

        產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體110 mL×1

        2-8保存

        試劑一

        液體20 mL×1

        2-8保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8保存

        試劑三

        液體4 mL×1

        2-8保存

        試劑四

        粉劑×2

        -20保存

        試劑五

        粉劑×1

        2-8保存

        試劑六

        粉劑×2

        -20保存

        試劑七

        液體4 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        粉劑×1

        -20保存

        溶液的配制:

        1、 提取液:低溫條件下,可能有結(jié)晶析出,放于60℃水浴加熱溶解即可,不影響使用;

        2、 試劑二:臨用前加入3.5 mL蒸餾水充分溶解,可加熱促進(jìn)溶解,用不完的試劑2-8℃保存4周;

        3、 試劑四:臨用前取1支加入0.2 mL蒸餾水溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;為延長(zhǎng)試劑盒使用時(shí)間故多提供一支;

        4、 試劑五:臨用前加入1 mL蒸餾水充分溶解,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        5、 試劑六:臨用前取1支加入0.25 mL蒸餾水備用,用不完的試劑-20℃分裝保存2周,避免反復(fù)凍融;為延長(zhǎng)試劑盒使用時(shí)間故多提供一支;

        6、 標(biāo)準(zhǔn)品:5 mg ATP臨用前加入0.826 mL蒸餾水配成10 μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)溶液,用不完的試劑-20℃分裝保存4周,避免反復(fù)凍融;

        7、 0.4μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:臨用前吸取20μL 10 μmol/mLATP標(biāo)準(zhǔn)溶液和480μL蒸餾水混合配制成0.4μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液,用于標(biāo)準(zhǔn)管的測(cè)定;

        8、 工作液的配制:臨用前按試劑二(mL):試劑三(mL)試劑四(mL):試劑五(mL):試劑六(mL)=0.2mL0.2mL0.02mL0.08mL0.02mL的比例配制0.52mL,約10T的量),現(xiàn)配現(xiàn)用。

        產(chǎn)品說明:

        ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是生物能量通貨,能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP 含量并且計(jì)算能荷,能夠反映能量代謝狀態(tài)。

        HK催化葡萄糖和ATP合成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH,WST-1 可與 NADPH 反應(yīng),產(chǎn)生水溶性 formazan,在 450nm 下有特征吸收峰。

        技術(shù)指標(biāo):

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、低溫離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、微量玻璃比色皿/ 96孔板、研缽/勻漿器/超聲波細(xì)胞破碎儀、蒸餾水、冰和氯仿。

        操作步驟:

        一、樣本處理可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn)

        1、 血清(漿)中ATP 的提?。喊凑昭澹{)體積(mL):提取液體積(mL)為15~10的比例(建議取約0.1mL血清(漿),加入1mL 提取液)混合,充分震蕩,10000g4離心10min;取上清液至另一EP 管中,加入500μL氯仿充分震蕩混勻,10000g 4離心3min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

        2、 組織中ATP 的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿,10000g 4離心10min,取上清至另一EP 管中,加入500μL氯仿充分震蕩混勻,10000g 4離心3min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

        3、 細(xì)胞或細(xì)菌中ATP 的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎(冰浴,功率200W,超聲2s,停1s,總時(shí)間1min),10000g 4離心10min;取上清液至另一EP管中,加入500μL氯仿充分震蕩混勻,10000g 4離心3min,取上清,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

        注:以上提取過程嚴(yán)格控制在冰浴條件下進(jìn)行。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到450nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、 試劑一置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中預(yù)熱15min以上。

        3、 (按下表在1.5mLEP管或96孔板中加入相應(yīng)試劑)

        試劑名稱(μL)

        測(cè)定管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        20

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液

        -

        20

        -

        蒸餾水

        -

        -

        20

        試劑一

        130

        130

        130

        工作液

        50

        50

        50

        混勻,置于37水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1h

        試劑七

        30

        30

        30

        充分混勻,吸取200μL反應(yīng)液于微量玻璃比色皿或者96孔板中測(cè)定450nm處的吸光值,記為A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白,計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白(空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次)。

        三、ATP 含量計(jì)算

        1、 血清(漿)中ATP 含量計(jì)算

        ATP含量(μmol/mL) = C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V提取+V血清(漿))÷V血清(漿)

        =4.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

        2. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        ATP含量(μmol/g 質(zhì)量)= C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷W =0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

        3. 按蛋白濃度計(jì)算:

        ATP含量(μmol/mg prot= C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣本÷V樣本×Cpr=0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

        4. 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        ATP含量(μmol/104 cell= C標(biāo)準(zhǔn)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V提取÷N = 0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N

        C標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,0.4μmol/mL;V提取:加入的提取液體積,1mLV血清(漿):血清(漿)體積,0.1mLV樣本:反應(yīng)體系中加入的樣本體積:0.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;N:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以104個(gè)。

        注意事項(xiàng):

        1、 加入提取液離心后的上清若為渾濁為正常現(xiàn)象。

        2、 如果ΔA測(cè)定>1.5,建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。注意計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù);如果吸光值過低或接近空白,建議統(tǒng)一放置于37水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2h或更長(zhǎng)時(shí)間后再次測(cè)定,也可以加大樣本量后進(jìn)行測(cè)定,注意同步修改計(jì)算公式。

        3、 提取液中含蛋白變性成分,若按蛋白濃度計(jì)算需要另取樣本重新計(jì)算。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 0.108g兔肌肉組織加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,10000g 4℃離心10min,取上清至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上按照測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=0.222-0.118=0.104,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.466-0.118=0.348,按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得

        ATP含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=1.107μmol/g 質(zhì)量。

        2、 0.1g 蒜苗加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,10000g 4℃離心10min,取上清至另一EP管中,加入500μL的氯仿充分震蕩混勻,10000g 4℃離心3min,取上清,置冰上按照測(cè)定步驟操作,使用96孔板測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=0.284-0.118=0.166,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.466-0.118=0.348按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得

        ATP含量(μmol/g 質(zhì)量)=0.4×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W=1.908μmol/g 質(zhì)量。

        參考文獻(xiàn)

        [1] Lin X, Wu Y, Chen X, et al. Determination of adenosine phosphate in tobacco leaf by UPLC with phenol-TEA pretreatment [J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014, 20(1): 26-31.

        [2] Beutler E, Mathai C K. A comparison of normal red cell ATP levels as measured by the firefly system and the hexokinase system[J]. Blood, 1967, 30(3): 311-320.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0060/BC0065   Na+k+-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒

        BC0960/BC0965   Ca++Mg++-ATP酶活性檢測(cè)試劑盒

         

        ATP含量檢測(cè)試劑盒 微量法 ATP含量檢測(cè)試劑盒 微量法

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