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        • 蘋果酸含量檢測試劑盒 三羧循環(huán)
        產(chǎn)品名稱:

        蘋果酸含量檢測試劑盒 三羧循環(huán)

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        蘋果酸含量檢測試劑盒 三羧循環(huán)
        有效期
        6個(gè)月
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        單位

        中文名稱
        蘋果酸含量檢測試劑盒
        英文名稱
        Malic Acid Content Assay kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5490
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途蘋果酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        AX蘋果酸含量檢測試劑盒(WST顯色法)說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC5490

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體5 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體20 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體12 mL×2

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑四稀釋液

        液體8 mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前加入13 mL 蒸餾水混勻,可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        2. 試劑四:臨用前加入80μL試劑四稀釋液溶解(可震蕩促進(jìn)溶解),可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3. 試劑四工作液:臨用前按試劑四:試劑四稀釋液=10μL1mL(約8T)的比例稀釋試劑四備用,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        4. 標(biāo)準(zhǔn)品:100μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液;

        5. 0.4μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液臨用前取20μL 100μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液,加入480μL蒸餾水,充分混勻,配制成4μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液;再取100μL 4μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液,加入900μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.4μmol/mL 蘋果酸標(biāo)準(zhǔn)液使用,現(xiàn)配現(xiàn)用,作為標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)溶液使用。(實(shí)驗(yàn)中每管需要100μL標(biāo)準(zhǔn)品,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積)。

        產(chǎn)品說明:

        L-蘋果酸是三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物,也是蘋果酸-天冬氨酸穿梭的重要組成部分。蘋果酸-天冬氨酸穿梭是氧化磷酸化的還原當(dāng)量跨線粒體膜運(yùn)輸過程所必需的。在低等生物體內(nèi),蘋果酸在蘋果乳酸發(fā)酵的過程中轉(zhuǎn)化為乳酸,同時(shí)產(chǎn)生CO2。蘋果酸常用作食品和制藥工業(yè)的添加劑,蘋果酸的定量分析在啤酒、葡萄酒、奶酪和水果生產(chǎn)領(lǐng)域也具有至關(guān)重要的作用。

        蘋果酸脫氫酶催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸、NADHNH4+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH 反應(yīng),產(chǎn)生水溶性Formazan,在450nm下有最大吸收峰,據(jù)此可計(jì)算蘋果酸含量。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)、分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細(xì)胞破碎儀、離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(106個(gè)):提取液一體積(mL)為5~101的比例(建議5百萬細(xì)胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,12000g離心10min后取上清待測。

        注:提取液二需緩慢加入,加入后會(huì)產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進(jìn)行操作。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,波長調(diào)至450nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 加樣表:(按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>EP管中)

        試劑名稱(μL

        測定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        樣本

        100

        100

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        100

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        100

        試劑一

        265

        400

        265

        265

        試劑二

        200

        200

        200

        200

        試劑三

        300

        300

        300

        300

        試劑四工作液

        135

        -

        135

        135

        充分混勻,于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱避光準(zhǔn)確反應(yīng)30min,取全部反應(yīng)液到1mL比色皿中,于450nm處測定吸光值,分別記為A測定,A對(duì)照,A標(biāo)準(zhǔn),A空白,計(jì)算ΔA測定=A測定-A對(duì)照;ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。每個(gè)測定管需設(shè)置一個(gè)對(duì)照管,空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定1-2次。

        三、 蘋果酸含量的計(jì)算

        1. 按照蛋白含量計(jì)算

        蘋果酸含量(μmol/mg prot=ΔA測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣本÷V樣本×Cpr×F

        =0.4×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

        2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)=ΔA測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二)÷W×V上清÷V提取液一)×F =0.475×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

        3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

        蘋果酸含量(μmol/106 cell=ΔA測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二)÷N×V上清÷V提取液一)×F =0.475×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N×F

        4. 按照液體體積計(jì)算

        蘋果酸含量(μmol/mL
        = ΔA測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷(V提取液一+V液體)] ×F
        = 5.225×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F

        C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,0.4μmol/mL;V樣本:加入的樣本體積,0.1mLW:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;V上清:提取時(shí)上清液體積,0.8mL;V提取液二:加入的提取液二體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取液一體積,1mLN:細(xì)胞數(shù)量,106個(gè);V液體:液體樣本體積,0.1mL;F:稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

        1. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。

        2. ΔA測定的測定范圍在0.01-1.5之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定,如果測定吸光值小于線性范圍吸光值,需要增加樣本量后再次測定,注意同步計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1. 0.1g蘋果果肉加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清用蒸餾水稀釋4倍后按照測定步驟操作,使用1mL比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A對(duì)照=1.1520-0.1022= 1.0498,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.7413-0.1022=0.6391,按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得:

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= 0.475×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=31.21 μmol/g質(zhì)量。

        2. 0.1g肝臟加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后按照測定步驟操作,使用1mL比色皿測得計(jì)算ΔA測定=A測定-A對(duì)照=0.2746-0.1022=0.1724,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.7413-0.1022=0.6391,按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得:

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= 0.475×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =1.28 μmol/g質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0710/BC0715 α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

        BC0950/BC0955 琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

        BC0380/BC0385 丙 酮酸脫氫酶(PDH)活性檢測試劑盒

        BC1060/BC1065 檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒

        BC2200/BC2205 丙 酮酸(PA)含量檢測試劑盒

         

        蘋果酸含量檢測試劑盒 三羧循環(huán) 蘋果酸含量檢測試劑盒 三羧循環(huán)

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