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        • 蘋果酸含量檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        蘋果酸含量檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        有效期
        6個月
        儲存條件
        -20℃
        單位

        中文名稱
        蘋果酸含量檢測試劑盒 微量法
        英文名稱
        Malic Acid Content Assay kit
        檢測方法
        微量法
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5495
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途蘋果酸含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        蘋果酸含量檢測試劑盒(WST顯色法)說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5495

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體8 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體8mL×1

        2-8℃保存

        試劑四

        液體20μL×1

        2-8℃保存

        試劑四稀釋液

        液體3 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑二:臨用前加入5 mL 蒸餾水混勻,可分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融,-20℃保存4周; 

        2. 試劑四:臨用前按試劑四:試劑四稀釋液=10μL1mL(約40T的比例稀釋試劑四備用,現(xiàn)用現(xiàn)配,用多少配多少;

        3. 標準品:100μmol/mL 蘋果酸標準液。臨用前取10μL 100μmol/mL 蘋果酸標準液,加入240μL蒸餾水,充分混勻,配制成4μmol/mL 蘋果酸標準液;再取100μL 4μmol/mL 蘋果酸標準液,加入900μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.4μmol/mL 蘋果酸標準液使用,現(xiàn)配現(xiàn)用。(實驗中每管需要20μL,為減小實驗誤差,故配制大體積)。                                                                                       

        產(chǎn)品說明:

        L-蘋果酸是三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物,也是蘋果酸 - 天冬氨酸穿梭的重要組成部分。 蘋果酸-天冬氨酸穿梭是氧化磷酸化的還原當(dāng)量跨線粒體膜運輸過程所必需的。在低等生物體內(nèi),蘋果酸在蘋果乳酸發(fā)酵的過程中轉(zhuǎn)化為乳酸,同時產(chǎn)生CO2。蘋果酸常用作食品和制藥工業(yè)的添加劑,蘋果酸的定量分析在啤酒、葡萄酒、奶酪和水果生產(chǎn)領(lǐng)域也具有至關(guān)重要的作用。

        蘋果酸脫氫酶催化蘋果酸和NAD生成草酰乙酸、NADHNH4+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH 反應(yīng),產(chǎn)生水溶性Formazan,在450nm下有最大吸收峰,據(jù)此可計算蘋果酸含量。

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:                                                                                                 

        分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細胞破碎儀、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水

        浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        細胞:按照細胞數(shù)量(106個):提取液一體積(mL)為5~101的比例(建議5百萬細胞加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,12000g離心10min后取上清待測。

        注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。

        二、測定步驟

        1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,波長調(diào)至450nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2. 加樣表:(按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>96孔板/1.5mL EP管中)

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標準管

        空白管

        樣本

        20

        20

        -

        -

        標準品

        -

        -

        20

        -

        蒸餾水

        -

        -

        -

        20

        試劑一

        55

        80

        55

        55

        試劑二

        40

        40

        40

        40

        試劑三

        60

        60

        60

        60

        試劑四

        25

        -

        25

        25

        充分混勻,于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱準確避光反應(yīng)30min,于450nm處測定吸光值,分別記為A測定,A對照,A標準,A空白,計算ΔA測定=A測定-A對照;ΔA標準= A標準-A空白。每個測定管需設(shè)置一個對照管,空白管和標準管只需測定1-2次。

        三、蘋果酸含量的計算

        1. 按照樣本蛋白濃度計算

        蘋果酸含量(μmol/mg prot= ΔA測定×C標準÷ΔA標準×V樣本÷V樣本×Cpr×F

        = 0.4×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr×F

        2. 按照樣本質(zhì)量計算

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= ΔA測定×C標準÷ΔA標準× (V上清+V提取液二) ÷ (W×V上清÷V提取液一) × F

        = 0.475×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F

         

        3. 按照細胞數(shù)量計算

        蘋果酸含量(μmol/106 cell= ΔA測定×C標準÷ΔA標準× (V上清+V提取液二) ÷ (N×V上清÷V提取液一) ×F

        = 0.475×ΔA測定÷ΔA標準÷N×F

        4. 按照液體體積計算

        蘋果酸含量(μmol/mL

        = ΔA測定×C標準÷ΔA標準× (V上清+V提取液二) ÷ [V液體×V上清÷ (V提取液一+V液體)] ×F

        = 5.225×ΔA測定÷ΔA標準×F

        C 標準:標準管濃度,0.4μmol/mL;V樣本:加入的樣本體積,0.02mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;V上清:提取時上清液體積,0.8mL;V提取液二:加入提取液二的體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取液一體積,1mL;N:細胞數(shù)量,106個;V液體:液體樣本體積,0.1mL;F:稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。

        2. ΔA測定的測定范圍在0.01-1之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定,如果測定吸光值小于線性范圍吸光值,需要增加樣本量后再次測定,注意同步計算公式。

        實驗實例:

        1. 0.1075g香蕉果肉加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后用蒸餾水稀釋8倍后按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算,ΔA測定=A測定-A對照=0.581-0.098= 0.483,ΔA標準=A標準-A空白=0.409-0.101=0.308,按樣本質(zhì)量計算含量得:

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= 0.475×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.475×0.483÷0.308÷0.1075×8=55.43 μmol/g質(zhì)量。

        2. 0.1033g鼠肝加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算,ΔA測定=A測定-A對照=0.271-0.118=0.153,ΔA標準=A標準-A空白=0.409-0.101=0.308,按樣本質(zhì)量計算含量得:

        蘋果酸含量(μmol/g 質(zhì)量)= 0.475×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.475×0.153÷0.308÷0.1033×1=2.28 μmol/g質(zhì)量。

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0710/BC0715 α-酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)活性檢測試劑盒

        BC0950/BC0955 琥珀酸脫氫酶(SDH)活性檢測試劑盒

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        BC2200/BC2205 丙 酮 酸(PA)含量檢測試劑盒

        蘋果酸含量檢測試劑盒 微量法蘋果酸含量檢測試劑盒 微量法

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