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        • 羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性盒 脂肪酸
        產(chǎn)品名稱:

        羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性盒 脂肪酸

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性盒 脂肪酸
        單位

        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        羥甲基戊二酰輔*A 合成酶(HMGCS)活性檢測試劑盒
        英文名稱
        Hydroxymethylglutaryl Coenzyme A Synthase Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5430
        規(guī)格50T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        羥甲基戊二酰輔*A合成酶(HMGCS)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC5430

        規(guī)格:50T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑三

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑一:臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解。-20℃分裝以保存4周,避免反復(fù)凍融。

        2、 試劑一工作液的配制:按照試劑一蒸餾水=50μL1150μL1.2mL,約9T)的比例配制,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,當(dāng)天用完。

        3、 試劑二:臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解。-20℃分裝以保存4周,避免反復(fù)凍融。

        4、 試劑二工作液的配制:按照試劑二蒸餾水=100μL1100μL1.2mL,約9T)的比例配制,根據(jù)樣本量現(xiàn)配現(xiàn)用,當(dāng)天用完

        產(chǎn)品說明:

        甲羥戊酸途徑 是一個非常重要的代謝途徑,參與許多重要萜類的前體物的合成,是萜類生物合成的重要途徑。羥甲基戊二酰輔*A合成酶催化乙酰CoA和乙酰乙酰CoA,生成羥甲基戊二酰輔*A,是膽*醇和類異 戊二烯生物合成中的關(guān)鍵步驟。

        HMGCS催化乙酰CoA與乙酰乙酰CoA生成羥甲基戊二酰CoA,同時產(chǎn)生CoASH,使DTNB轉(zhuǎn)化為黃色的TNB,在412nm下有特征吸光值。

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

         

        1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),

        進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(106個):提取液體積(mL)為5~101的比例(建議5萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        二、 測定步驟

        1. 可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至412nm,蒸餾水調(diào)零。

        2. 根據(jù)樣本量取部分試劑一工作液、試劑二工作液、試劑三于37℃預(yù)熱10min。

        3. 操作表:(在微量玻璃比色皿中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        試劑一工作液

        125

        125

        試劑二工作液

        125

        125

        試劑三

        250

        250

        500

        -

        提取液

        -

        500

        將上述試劑加入微量玻璃比色皿中充分混勻,412nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴鍋或者恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)20min,拿出迅速擦干測定20min10s時的吸光值A2,記錄412nm10s時吸光值A120min后的吸光值A2。計算ΔA測定=A2測定-A1測定,ΔA空白=A2空白-A1空白,ΔA=ΔA測定-ΔA空白。空白管只需做1-2。

        三、HMGCS活性計算

        1. 按蛋白濃度計算

        酶活定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為一個酶活力單位。

        HMGCS活性U/mg prot=ΔA÷ε×d×109×V反總÷V×Cpr÷T=7.353×ΔA÷Cpr

        2. 按樣本質(zhì)量計算

        酶活定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為一個酶活力單位。

        HMGCS活性U/g 質(zhì)量)=ΔA×V反總÷ε×d×109÷W ×V ÷V 樣總)÷T=7.353×ΔA÷W

        3. 細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計算

        酶活定義:每106個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為一個酶活力單位。

        HMGCS活性U/106 cell)=ΔA×V反總÷ε×d×109÷N×V÷V樣總)÷T=7.353×ΔA÷N

        V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3L;εTNB摩爾消光系數(shù),1.36×104L/mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.5mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,20min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;N:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),106。

        注意事項(xiàng):

        1. 如果ΔA吸光值過低或接近空白,適當(dāng)延長反應(yīng)時間或加大樣本量后,重新測定。注意同步修改計算公式。

        2. 如果A21或者ΔA0.8,建議將樣本適當(dāng)稀釋后或者縮短反應(yīng)時間進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

         

        1、 稱取0.1046g平菇,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿提取液將上清稀釋2倍,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A2測定-A1測定=0.901-0.565=0.336,?A空白=A2空白-A1空白=0.150-0.103=0.047,?A=?A測定-?A空白=0.289按樣本質(zhì)量計算酶活得

        HMGCS活性U/g 質(zhì)量)=7.353×ΔA÷W×2=40.63 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1070g青椒,加入提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A2測定-A1測定=0.476-0.340=0.136,?A空白=A2空白-A1空白=0.150-0.103=0.047,?A=?A測定-?A空白=0.089按樣本質(zhì)量計算酶活得

        HMGCS活性U/g 質(zhì)量)=7.353×ΔA÷W=6.12 U/g 質(zhì)量

        參考文獻(xiàn):

        [1] Skaff D A, Miziorko H M. A visible wavelength spectrophotometric assay suitable for high-throughput screening of 3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA synthase[J]. Analytical Biochemistry, 2010, 396(1):96-102

        [2] Scharnagl H, W M?rz, Schliack M, et al. A novel assay for cytosolic 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A synthase activity using reversed-phase ion-pair chromatography: demonstration that Lifibrol (K12.148) modulates the enzyme activity[J]. Journal of Lipid Research, 1995, 36(3):622-627.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0550/BC0555 脂肪酸合成酶FAS活性檢測試劑盒

        BC0590/BC0595 游離脂肪酸FFA含量檢測試劑盒

        BC0620/BC0625 甘油三酯TG含量檢測試劑盒

        BC1890/BC1895 游離膽*醇FC含量檢測試劑盒

        BC1980/BC1985 總膽*醇TC含量檢測試劑盒

        BC2340/BC2345 脂肪酶LPS)活性檢測試劑盒

         

         

         


         

         羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性盒 脂肪酸 羥甲基戊二酰輔*A 合成酶活性盒 脂肪酸

         

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