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        • 碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法
        產品名稱:

        碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-19
        中文名稱
        碳酸酐酶活性檢測試劑盒 微量法
        有效期
        6個月
        儲存條件
        2-8℃
        單位

        英文名稱
        Carbonic Anhydrase Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/96S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5445
        規(guī)格100T/96S供貨周期現貨
        主要用途碳酸酐酶活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        碳酸酐酶活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5445

        規(guī)格:100T/96S

        產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體120 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體20mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×2

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:試劑放于試劑瓶內玻璃瓶中。臨用前取一支試劑二,加入200μL丙酮充分震蕩溶解,-20℃可以分裝保存1周,避免反復凍融。

        2、 試劑二工作液:臨用前按試劑二:蒸餾水=20μL480μL12T)的比例進行混合配制成試劑二工作液,現用現配,用多少配多少。 

        3、 標準品:5μmol/mL 酚標準液臨用前取100μL5μmol/mL 酚標準液于EP管中,加入700μL蒸餾水充分混合,配0.625 μmol/mL的酚標準液。 

        產品說明:

        碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase, CA, EC4.2.1.1)是一種以Zn2+為活性中心的金屬酶,可用來高效催化CO2的可逆水合反應:CO2+H2O?HCO3-+H+,催化速率可達自然條件下的107倍,是目前已知催化速率最快的酶之一。

        碳酸酐酶可催化乙酸對硝基苯酯反應生成對硝基苯*,通過檢測405nm處吸光值上升速率反映碳酸酐酶活性。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),8000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3、液體:直接測定。(若溶液呈現渾濁,則離心取上清后再測定)。

        二、測定步驟

         

        1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,調節(jié)波長至405nm,可見分光光度計用蒸餾水調零。

        2、 標準管測定

        (1) 標準管的測定:微量玻璃比色皿/96孔板加入20μL標準液,180μL試劑一,充分混勻后于405nm處測定吸光值,記A標準。

        (2) 標準空白管的測定:微量玻璃比色皿/96孔板加入20μL蒸餾水,180μL試劑一,充分混勻后于405nm處測定吸光值,記A標準空白。

        (3) 計算?A標準=A標準-A標準空白。(標準和標準空白管只需做1-2次。)

        3、 操作表:(在微量玻璃比色皿或者96孔板內依次加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        空白管

        樣本

        20

        -

        提取液

        -

        20

        試劑一

        140

        140

        試劑二工作液

        40

        40

        按照加樣表依次在微量玻璃比色皿/96孔板加入上述試劑,充分混勻后于405nm處測定10s時的吸光值A1,迅速置于37℃水浴或恒溫培養(yǎng)箱5min(酶標儀有控溫功能可將溫度調至37℃),拿出迅速擦干測定5min10s時的吸光值A2。計算A測定=A2測定-A1測定A空白=A2空白-A1空白,?A =A測定-A空白。(空白管只需做1-2次。)

        三、CA活性計算

        (1) 按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:37℃,每mg組織蛋白每分鐘催化產生1μmol 對硝基*酚定義為一個酶活力單位。

        CA活性(U/mg prot= C×?A÷?A標準×V÷V×Cpr÷T×F=0.125×?A÷?A標準÷Cpr ×F

        (2) 按樣本質量計算

        單位的定義:37℃,每g組織每分鐘催化產生1μmol 對硝基*定義為一個酶活力單位。

        CA活性(U/g 質量)= C×?A÷?A標準×V÷V÷V樣總×W ÷T×F=0.125×?A÷?A標準÷W×F

        (3) 按液體體積計算

        單位的定義:每mL液體每分鐘催化產生1μmol 對硝基酚定義為一個酶活力單位。

        CA活性(U/mL= C×?A÷?A標準× V÷V÷T×F=0.125×?A÷?A標準×F

        C:標準品濃度,0.625μmol/mL;V:反應體系中加入的樣本體積,0.02mL;V樣總:加入的提取液體積,1mLT:反應時間,5min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mLW:樣本質量,g; F:樣本稀釋倍數。

        注意事項:

        如果A1測定大于0.5或者?A大于1,可以用蒸餾水對樣本進行稀釋或者縮短37℃酶促反應時間;?A小于0.02,可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應時間。注意計算時同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1029g小鼠肝臟組織,加入提取液進行冰浴勻漿,離心后取上清,將上清稀釋40倍后,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算A測定=A2測定-A1測定=0.809-0.182=0.627,A空白=A2空白-A1空白=0.155-0.115=0.040,?A =A測定-A空白=0.587,?A標準=A標準-A標準空白=0.627-0.047=0.58帶入公式計算:

        CA活性(U/g 質量)=0.125×?A÷?A標準÷W×F =49.177 U/g 質量

         

         

         

        2、 稱取0.1058g娃娃菜葉片組織,加入提取液進行冰浴勻漿,離心后取上清,用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,用96孔板測得計算A測定=A2測定-A1測定=0.408-0.155=0.253,A空白=A2空白-A1空白=0.155-0.115=0.040?A =A測定-A空白=0.213,?A標準=A標準-A標準空白=0.627-0.047=0.58,帶入公式計算:

        CA活性(U/g 質量)=0.125×?A÷?A標準÷W×F =0.868 U/g 質量

        3、 吸取20μL兔血清,稀釋2倍后,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算A測定=A2測定-A1測定=1.097-0.251=0.846A空白=A2空白-A1空白=0.155-0.115=0.040,?A =A測定-A空白=0.806?A標準=A標準-A標準空白=0.627-0.047=0.58,帶入公式計算: 

        CA活性(U/mL=0.125×?A÷?A標準×F =0.347 U/mL

        參考文獻:

        [1] BROWNELL, P. F, BIELIG, et al. Increased Carbonic Anhydrase Activity in Leaves of Sodium-Deficient C4 Plants[J]. Functional Plant Biology, 1991, 18(6):589-592.

        [2] A, V. Tavallali , et al. Zinc influence and salt stress on photosynthesis, water relations, and carbonic anhydrase activity in pistachio. Scientia Horticulturae, 2009, 123(2): 272-279.

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