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        • L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解
        產(chǎn)品名稱:

        L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        中文名稱
        L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解
        單位

        英文名稱
        Lactic acid(LA) content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5345
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途L -乳酸(L -LA)含量檢測應(yīng)用領(lǐng)域化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥,綜合

        L-乳酸(L-LA)含量檢測試劑盒(WST顯色法)說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5345

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液一

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        提取液二

        液體10 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體6 mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體20μL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑四

        液體4 mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        粉劑×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前按試劑二(V):蒸餾水(V=10μL450μL46T)的比例配制試劑二溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

        2、 試劑三:臨用前每瓶加入3 mL 蒸餾水混勻,可分裝后-20℃保存4周,避免反復(fù)凍融;

        3、 標準品:臨用前加入1.04 mL蒸餾水配成100 μmol/mL 的標準溶液,2-8℃可保存12周;

        產(chǎn)品說明:

        乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān),乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時使NAD+還原生成NADHH+,在1-mPMS作用下,WST-1可與NADH反應(yīng),產(chǎn)生水溶性formazan,其在450nm處有最大吸收峰,據(jù)此可計算乳酸含量。


        注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

        需自備的儀器和用品:

        分析天平、研缽/勻漿器/超聲波細胞破碎儀、離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水

        浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、蒸餾水。 

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

         

        1. 組織:按照質(zhì)量(g):提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        2. 細胞或細菌:按照細胞/細菌數(shù)量(104個):提取液一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞/細菌加入1mL提取液一),冰浴超聲波破碎細胞/細菌(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);于4℃,12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        3. 血清(漿)等液體:取100μL液體加入1mL提取液一,4℃ 12000g離心10min,取0.8mL上清液,再緩慢加入0.15mL提取液二,緩慢吹打混勻至無氣泡產(chǎn)生,4℃ 12000g離心10min后取上清待測。

        注:提取液二需緩慢加入,加入后會產(chǎn)生大量氣泡,建議使用2mL EP管進行操作。

        二、 測定步驟

        1、分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上,波長調(diào)至450nm,分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2、 標準液的稀釋:將100μmol/mL的標準溶液用蒸餾水稀釋為1.250.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.020μmol/mL的標準溶液備用。

        3、標準品稀釋表:

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        100

        50

        950

        5

        2

        5

        250

        750

        1.25

        3

        1.25

        500

        500

        0.625

        4

        0.625

        200

        200

        0.3125

        5

        0.3125

        200

        200

        0.15625

        6

        0.15625

        200

        200

        0.078

        7

        0.078

        200

        200

        0.039

        8

        0.039

        200

        200

        0.020

        實驗中每個標準管需10µL標準溶液

        3、加樣表:(按順序?qū)⑾铝性噭┘釉?/span>96孔板/EP管中)

        試劑名稱

        測定管

        對照管

        標準管

        空白管

        樣本(μL

        10

        10

        -

        -

        標準品(μL

        -

        -

        10

        -

        蒸餾水(μL

        -

        10

        -

        10

        試劑一(μL

        40

        40

        40

        40

        試劑二(μL

        10

        -

        10

        10

        試劑三(μL

        20

        20

        20

        20

        試劑四(μL

        30

        30

        30

        30

        充分混勻,于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱準確避光反應(yīng)30min。

        蒸餾水(μL

        90

        90

        90

        90

        混勻后,于450nm處測定吸光值,分別記為A測定管,A對照管,A標準管,A空白管,計算ΔA測定=A測定管-A對照管;ΔA標準= A標準管-A空白管。每個測定管需設(shè)置一個對照管,空白管和標準曲線只需測定1-2次。

        三、 乳酸含量的計算

        1、標準曲線的繪制

        以各標準溶液濃度為x軸,以其對應(yīng)的吸光值(ΔA標準)為y軸,繪制標準曲線,得到標準方程y=kx+b,將ΔA測定帶入公式中得到xμmol/mL)。

        2、乳酸含量計算

        1)按照樣本蛋白濃度計算

        LA含量(μmol/mg prot=x×V樣本÷V樣本×Cpr= x÷Cpr

        2)按照樣本質(zhì)量計算

        LA含量(μmol/g 質(zhì)量)=x×V上清+V提取液二)÷ W×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷W

        3)按照細胞/細菌數(shù)量計算

        LA含量(μmol/104 cell=x×V上清+V提取液二)÷ N×V上清÷V提取液一)=1.1875×x÷N

        4)按照液體體積計算

        LA含量(μmol/mL=x×V上清+V提取液二)÷ [V液體×V上清÷V提取液一+V液體)]=13.0625×x

        V樣本:加入的樣本體積,0.01mL;W:樣本質(zhì)量,g;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,蛋白濃度需自行測定;V上清:提取時上清液體積,0.8mLV提取液二:加入提取液二的體積,0.15mL;V提取液一:加入的提取

        液一體積,1mL;N:細胞/細菌數(shù)量,104個;V液體:液體樣本體積,0.1mL。

        注意事項:

        1. ΔA測定的測定范圍在0.01-1.1之間。如果測定吸光值超過線性范圍吸光值,可以用蒸餾水稀釋樣本后再次測定,如果測定吸光值小于線性范圍吸光值,需要增加樣本量后再次測定,注意同步計算公式。

        2. 提取液一中含有蛋白質(zhì)沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。如需測定蛋白含量,需另取組織。

        實驗實例:

        1、 0.1466g小鼠肝加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清后用蒸餾水稀釋兩倍,按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.573-0.091=0.482,根據(jù)標準曲線y=0.8941x+0.0016,R2=0.9991,計算x=0.5373,按樣本質(zhì)量計算含量得:

        LA含量(μmol/g 質(zhì)量)= 1.1875×x÷W×稀釋倍數(shù)=1.1875×0.5373÷0.1466×2=8.7046 μmol/g質(zhì)量。

        2、 0.1063g紅薯根加入1mL提取液一,冰浴勻漿后離心,取0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.128-0.105=0.023,根據(jù)標準曲線y=0.8941x+0.0016R2=0.9991,計算x=0.0239,按樣本質(zhì)量計算含量得:

        LA含量(μmol/g 質(zhì)量)=1.1875×x÷W=1.1875×0.0239÷0.1063=0.2674 μmol/g質(zhì)量。

        3、 100μL羊血清加入1mL提取液一,離心,0.8mL上清后加0.15mL提取液二,離心取上清,之后按照測定步驟操作,使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.424-0.104=0.320,根據(jù)標準曲線y=0.8941x+0.0016,R2=0.9991,計算x=0.3561,按照液體體積計算含量得:

        LA含量(μmol/mL=13.0625×x=13.0625×0.3561=4.6517 μmol/mL

        參考文獻:

        Eolbergrová J, MacMillan V, Siesj? B K. The effect of moderate and marked hypercapnia upon the energy state and upon the cytoplasmic NADH/NAD+ ratio of the rat brain[J]. Journal of neurochemistry, 1972, 19(11): 2497-2505.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0740/BC0745 己糖激酶(HK)活性檢測試劑盒

        BC0540/BC0545 丙酮酸激酶(PK)活性檢測試劑盒

        BC0530/BC0535 磷酸果糖激酶(PFK)活性檢測試劑盒


        L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解 L -乳酸(L -LA)含量檢測試劑盒 糖酵解

         

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