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        • 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Fluoride Resistant Acid Phosphatase Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5455
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        抗氟離子酸性磷酸酶(FRAP)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號(hào):BC5455

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體1.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體1.2mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體0.3mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        液體1.2mL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        液體1.2mL×1

        2-8℃保存

        試劑八

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑三:臨用前加入1mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融。一支試劑溶解后可以做100T,為了延長試劑盒使用時(shí)間,因此多給一支粉劑。

        2、 試劑四:臨用前加入5.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑2-8℃保存可以保存4。

        3、 試劑五:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑五:蒸餾水=1:9的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        4、 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取100μL5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液EP管中,加入300μL蒸餾水充分溶解,配1.25 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        抗氟離子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosphatase, FRAP)是酸性磷酸酶的一種。抗氟離子酸性磷酸酶主要分布于在絕大多數(shù)細(xì)胞的溶酶體中、前列腺(prostate gland)、腦、肝臟、脾臟和血小板。

        抗氟離子酸性磷酸酶的活性不被氟離子抑制,而其他的酸性磷酸酶的活性則會(huì)受到氟離子的抑制。酸性條件下,抗氟離子酸性磷酸酶催化PN PP生成對硝 基苯*。對硝 基苯*在堿性條件下呈黃色,可以在400nm波長下檢測吸光度。產(chǎn)物黃色越深,說明抗氟離子酸性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟

        一、 樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

         

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3、液體:直接測定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁,則離心取上清后再測定)

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,可見分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、操作表:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        標(biāo)準(zhǔn)空白管

        樣本

        10

        10

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        10

        -

        蒸餾水

        -

        10

        -

        10

        試劑一

        10

        10

        10

        10

        試劑二

        10

        10

        10

        10

        試劑三

        10

        -

        10

        10

        試劑四

        10

        10

        10

        10

        試劑五

        10

        10

        10

        10

        試劑六

        10

        10

        10

        10

        試劑七

        10

        10

        10

        10


        37℃避光反應(yīng)30min

        -

        -

        試劑八

        120

        120

        120

        120

        混勻后,測定在400nm處的吸光度,記作A測定,A對照A標(biāo)準(zhǔn),A標(biāo)準(zhǔn)空白。?A測定=A測定-A對照,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。)

        三、FRAP活性計(jì)算

        (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個(gè)酶活力單位。

        FRAP活性(U/mg prot=(?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷Cpr×V÷T×103×F=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個(gè)酶活力單位。

        FRAP活性(U/g 質(zhì)量)= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷W÷V樣總×V÷T×103×F=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

        (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)目計(jì)算

        單位的定義:每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個(gè)酶活力單位。

        FRAP活性(U/104 cell= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷N÷V樣總×V÷T×103×F=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

        (4) 按血清(漿)等液體體積計(jì)算

        單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個(gè)酶活力單位。

        FRAP活性(U/mL= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷V÷T×103×F=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

        C標(biāo)準(zhǔn)酚標(biāo)準(zhǔn)液,1.25 μmol/mL ;V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.01mL;V樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,30min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g103:單位換算系數(shù),1μmol/mL=103nmol/mL;N:細(xì)胞數(shù)量,以萬計(jì);F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng):

        1、 如果測定的吸光值或?A測定大于1.5,可以對樣本進(jìn)行稀釋或者縮短37℃酶促反應(yīng)時(shí)間;測定的吸光值或?A測定小于0.01,可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應(yīng)時(shí)間。最終計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1、 稱取0.1074g兔子肝臟組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,將上清液稀釋2倍后按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算?A測定=A測定-A對照=0.485-0.067=0.418,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.720-0.070=0.650,帶入公式計(jì)算:

        FRAP活性(U/g 質(zhì)量)=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =499.013 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1057g竹子葉,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算?A測定=A測定-A對照=0.396-0.110=0.286,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.720-0.070=0.650,帶入公式計(jì)算:

        FRAP活性(U/g 質(zhì)量)= 41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =173.461U/g 質(zhì)量

        3、 吸取0.01mL羊血清,按照測定步驟操作,用96孔板測得計(jì)算?A測定=A測定-A對照=0.126-0.070=0.056,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.720-0.070=0.650,帶入公式計(jì)算: 

        FRAP活性(U/mL=41.67×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F =3.590 U/mL 

        參考文獻(xiàn):

        [1] Megat R, Wahab A, Dasor M M, et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journ al of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219. 

        [2] Natasˇa Mitic′, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes

        an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC2140/BC2145 組織及血液堿性磷酸酶AKP/ALP活性檢測試劑盒

        BC2130/BC2135 組織及血液酸性磷酸酶ACP活性檢測試劑盒

        BC5400/BC5405 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性檢測試劑盒

         

        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法

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