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        • 抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒 酯酶
        產(chǎn)品名稱:

        抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒 酯酶

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測(cè)試劑盒 酯酶
        儲(chǔ)存條件
        -20℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Tartrate Resistant Acid Phosphatase(TRAP)Activity Assay Kit
        檢測(cè)方法
        可見(jiàn)分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5400
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測(cè)應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

        可見(jiàn)分光光度法

        貨號(hào)BC5400

        規(guī)格50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體8mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體0.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        液體3.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        液體3.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑八

        液體40mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入3.5mL試劑一,充分溶解。如果試劑溶解不充分,可將試劑加熱至50℃促進(jìn)其溶解。未用完的試劑2-8℃保存可以保存8周。

        2、 試劑三:臨用前加入3.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融。

        3、 試劑四:臨用前加入5.5mL蒸餾水溶解,未用完的試劑2-8℃保存可以保存4周。

        4、 試劑五:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑五:蒸餾水=1:9的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        5、 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取100μL5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液EP管中,加入700μL蒸餾水充分混合,配制成0.625 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        產(chǎn)品說(shuō)明

        抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)是破骨細(xì)胞的特征性酶,TRAP參與骨基質(zhì)中固體鈣磷礦化底物的降解,其表達(dá)和分泌與破骨細(xì)胞功能密切相關(guān)。

        在酒石酸存在的情況下,抗酒石酸酸性磷酸酶的活性不被抑制,而其他的酸性磷酸酶的活性則會(huì)受到抑制。酸性條件下,抗酒石酸酸性磷酸酶催化PNP P生成對(duì)硝 基苯*。對(duì)硝 **酚在堿性條件下呈黃色,可以在400nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度。產(chǎn)物黃色越深,說(shuō)明抗酒石酸酸性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低。

        需自備的儀器和用品

        可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

         

        操作步驟

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

        3、液體:直接測(cè)定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁,則離心取上清后再測(cè)定)。

        二、測(cè)定步驟

        1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至400nm,蒸餾水調(diào)零。

        2、操作表:(在EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測(cè)定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        標(biāo)準(zhǔn)空白管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        50

        -

        蒸餾水

        -

        50

        -

        50

        試劑一

        50

        50

        50

        50

        試劑二

        50

        50

        50

        50

        試劑三

        50

        -

        50

        50

        試劑四

        50

        50

        50

        50

        試劑五

        50

        50

        50

        50

        試劑六

        50

        50

        50

        50

        試劑七

        50

        50

        50

        50


        37℃避光反應(yīng)1小時(shí)

        -

        -

        試劑八

        600

        600

        600

        600

        混勻后,測(cè)定在400nm處的吸光度,記作A測(cè)定A對(duì)照,A標(biāo)準(zhǔn)A標(biāo)準(zhǔn)空白。?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。)

        三、TRAP活性計(jì)算

        (1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個(gè)酶活力單位。

        TRAP活性(U/mg prot=(?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷Cpr×V÷T×103×F=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計(jì)算

        單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個(gè)酶活力單位。

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)= (?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷W÷V樣總×V÷T×103×F=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

        (3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)目計(jì)算

        單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個(gè)酶活力單位。

        TRAP活性(U/104 cell= (?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷N÷V樣總×V÷T×103×F=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷N×F

         

        (4) 按血清(漿)等液體體積計(jì)算

        單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個(gè)酶活力單位。

        TRAP活性(U/mL= (?A測(cè)定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷V÷T×103×F=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

        C標(biāo)準(zhǔn):酚標(biāo)準(zhǔn)液,0.625 μmol/mL V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.05mLV樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,60min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)目,500萬(wàn);103:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1μmol/mL=103nmol/mL;N:細(xì)胞或細(xì)菌數(shù)量,以萬(wàn)計(jì);F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項(xiàng)

        1、 如果測(cè)定的吸光值或?A測(cè)定大于1.2,可以對(duì)樣本用蒸餾水進(jìn)行稀釋或者縮短37℃酶促反應(yīng)時(shí)間;?A測(cè)定小于0.01,可以加大樣本量或者延長(zhǎng)37℃酶促反應(yīng)時(shí)間。最終計(jì)算時(shí)同步修改計(jì)算公式。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例

        1、 稱取0.1006g兔子肝臟組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,將上清稀釋2按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.824-0.038=0.786,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.653-0.033=0.620,帶入公式計(jì)算:

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=262.622 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1000g竹子葉,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,將上清稀釋8按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.656-0.045=0.611,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.653-0.033=0.620,帶入公式計(jì)算:

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=821.499 U/g 質(zhì)量

        3、 吸取0.05mL人血清,按照測(cè)定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.197-0.157=0.040,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.653-0.033=0.620帶入公式計(jì)算: 

        TRAP活性(U/mL=10.42×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F=0.672 U/mL

        參考文獻(xiàn)

        [1] Megat R, Wahab A, Dasor M M, et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journal of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219.

        [2] Natasˇa Mitic′, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes

        an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.

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