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        • 抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Tartrate Resistant Acid Phosphatase(TRAP)Activity Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5405
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        貨號:BC5405

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體60 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體4mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×2

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體0.3mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        液體1.2mL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        液體1.2mL×1

        2-8℃保存

        試劑八

        液體15mL×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑二:臨用前加入1.2mL試劑一,充分溶解,如果試劑溶解不充分,可將試劑加熱至50℃促進溶解。未用完的試劑2-8℃保存可以保存8周。

        2、 試劑三:臨用前加入1mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑-20℃保存可以保存4周,避免反復(fù)凍融。一支試劑溶解后可以做100T,為了延長試劑盒使用時間,因此多給一支粉劑。

        3、 試劑四:臨用前加入5.5mL蒸餾水溶解,未用完的試劑2-8℃保存可以保存4周。

        4、 試劑五:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑五:蒸餾水=1:9的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        5、 標(biāo)準(zhǔn)品:5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液。臨用前取100μL5μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液EP管中,加入300μL蒸餾水充分溶解,配制成1.25 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)是破骨細胞的特征性酶,TRAP參與骨基質(zhì)中固體鈣磷礦化底物的降解,其表達和分泌與破骨細胞功能密切相關(guān)。

        在酒石酸存在的情況下,抗酒石酸酸性磷酸酶的活性不被抑制,而其他的酸性磷酸酶的活性則會受到抑制。酸性條件下,抗酒石酸酸性磷酸酶催化PN PP生成對硝 基*酚。對硝基*酚在堿性條件下呈黃色,可以在400nm波長下檢測吸光度。產(chǎn)物黃色越深,說明抗酒石酸酸性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

         

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        1、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。。

        3、液體:直接測定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁,則離心取上清后再測定)。

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,可見分光光度計用蒸餾水調(diào)零。

        2、操作表:(在96孔板或者EP管中加入下列試劑)

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        標(biāo)準(zhǔn)空白管

        樣本

        10

        10

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)品

        -

        -

        10

        -

        蒸餾水

        -

        10

        -

        10

        試劑一

        10

        10

        10

        10

        試劑二

        10

        10

        10

        10

        試劑三

        10

        -

        10

        10

        試劑四

        10

        10

        10

        10

        試劑五

        10

        10

        10

        10

        試劑六

        10

        10

        10

        10

        試劑七

        10

        10

        10

        10


        37℃避光反應(yīng)1小時

        -

        -

        試劑八

        120

        120

        120

        120

        混勻后,測定在400nm處的吸光度,記作A測定,A對照A標(biāo)準(zhǔn),A標(biāo)準(zhǔn)空白?A測定=A測定-A對照,?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白。(標(biāo)準(zhǔn)管和標(biāo)準(zhǔn)空白管只需做1-2次。)

        三、TRAP活性計算

        (1) 按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

        TRAP活性(U/mg prot=(?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷Cpr×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

        (2) 按樣本質(zhì)量計算

        單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷W÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

        (3) 按細菌或細胞數(shù)目計算

        單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個酶活力單位。

        TRAP活性(U/104 cell= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷N÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷N×F

        (4) 按血清(漿)等液體體積計算

        單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產(chǎn)生1nmol義為一個酶活力單位。

        TRAP活性(U/mL= (?A測定×C標(biāo)準(zhǔn)÷?A標(biāo)準(zhǔn)) ×V÷V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F

        C標(biāo)準(zhǔn):酚標(biāo)準(zhǔn)液,1.25 μmol/mL V:反應(yīng)體系中加入的樣本體積,0.01mL;V樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時間,60min;Cpr:蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g500:細胞或細菌數(shù)目,500萬;103:單位換算系數(shù),1μmol/mL=103nmol/mL;N:細胞或細菌數(shù)量,以萬計;F:樣本稀釋倍數(shù)。

        注意事項:

        1、 如果測定的吸光值或?A測定大于1.5,可以對樣本用蒸餾水進行稀釋或者縮短37℃酶促反應(yīng)時間;?A測定小于0.01,可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應(yīng)時間。最終計算時同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1057g兔子腎臟組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算?測定=A測定-A對照=0.824-0.096=0.728,?標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.820-0.065=0.755,帶入公式計算:

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=190.02 U/g 質(zhì)量

        2、 稱取0.1000g竹子葉,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,將上清稀釋4按照測定步驟操作,用96孔板測得計算?測定=A測定-A對照=0.900-0.089=0.811,?標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.820-0.065=0.755,帶入公式計算:

        TRAP活性(U/g 質(zhì)量)=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=895.0 U/g 質(zhì)量

        3、 吸取0.01mL人血清,按照測定步驟操作,用96孔板測得計算?測定=A測定-A對照=0.181-0.161=0.020,?標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A標(biāo)準(zhǔn)空白=0.820-0.065=0.755,帶入公式計算: 

        TRAP活性(U/mL=20.83×?A測定÷?A標(biāo)準(zhǔn)×F=0.552 U/mL

        參考文獻:

        [1] Megat R, Wahab A, Dasor M M, et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journal of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219.

        [2] Natasˇa Mitic′, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes

        an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC2140/BC2145 組織及血液堿性磷酸酶(AKP/ALP)活性檢測試劑盒

        BC2130/BC2135 組織及血液酸性磷酸酶(ACP)活性檢測試劑盒

        抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法 抗酒石酸酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 微量法

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