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        • 土壤植酸酶活性檢測試劑盒
        產(chǎn)品名稱:

        土壤植酸酶活性檢測試劑盒

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時間: 2024-04-19
        土壤植酸酶活性檢測試劑盒
        儲存條件
        2-8℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Sialic Acid Content Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S
        自備試劑
        該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5370
        規(guī)格50T/24S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途植酸酶(Phytase)又叫肌醇六磷酸酶,是一種蛋白質(zhì)和糖的結合酶,植酸酶可以分應用領域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤植酸酶活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。

        貨號:BC5370

        規(guī)格:50T/24S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體2.5 mL×1瓶(自備)

        2-8℃保存

        試劑二A

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二B

        液體50 mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1 mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:甲苯,需自備。

        2. 試劑二:臨用前將試劑二B全部倒入試劑二A中,充分震蕩溶解,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        3. 試劑三:臨用前加入7mL蒸餾水充分溶解,再將槍頭伸入液面下緩慢加入1.89mL濃硫酸,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        4. 試劑四:臨用前加入35mL蒸餾水充分溶解,再加入50μL濃硫酸,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        5. 工作液:臨用前根據(jù)測定數(shù)量將試劑三:試劑四=1mL5mL(約12T,可根據(jù)樣本量按比例調(diào)整)的比例混勻,配制后于2-8℃可保存3天。

        6. 標準品:10 μmol/mL無機磷標準液。

        產(chǎn)品說明:

        植酸酶(Phytase)又叫肌醇六磷酸酶,是一種蛋白質(zhì)和糖的結合酶,植酸酶可以分解植酸產(chǎn)生無機磷和肌醇,極大的提高生物對養(yǎng)分的利用率。土壤植酸酶主要來自于土壤中的微生物,在磷素循環(huán)中起著重要作用,土壤植酸酶在土壤改良和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展領域具有較強的應用前景。

        在一定的環(huán)境條件下,土壤植酸酶可以分解植酸鈉(肌醇六磷酸十二鈉)產(chǎn)生無機磷和肌醇衍生物,在酸性條件下,無機磷和鉬酸銨顯色劑發(fā)生反應,產(chǎn)生藍色的鉬藍物質(zhì),其在700nm有特征吸收峰,通過測定無機磷的含量,可計算出土壤植酸酶的活性。

         

        注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

         

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、研缽、30-50目篩、甲苯、濃硫酸、1mL玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

        新鮮土樣自然風干或 37℃烘箱風干,過 30~50 目篩。

        二、測定步驟

        1、可見分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至700nm,用蒸餾水調(diào)零。

        2、標準溶液的稀釋:將10μmol/mL無機磷標準液用蒸餾水稀釋至1.25、0.625、0.3125、0.156250.078125、0.039、0.02、0.01、0.005μmol/mL備用。

        3、標準溶液稀釋可參考下表

        序號

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標準液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        10

        200

        1400

        1.25

        2

        1.25

        700

        700

        0.625

        3

        0.625

        700

        700

        0.3125

        4

        0.3125

        700

        700

        0.15625

        5

        0.15625

        700

        700

        0.078125

        6

        0.078125

        700

        700

        0.039

        7

        0.039

        700

        700

        0.02

        8

        0.02

        700

        700

        0.01

        9

        0.01

        700

        700

        0.005

        備注:實驗中每個標準管需500µL標準溶液。

        4、在EP管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱

        測定管

        對照管

        標準管

        空白管

        土樣(g)

        0.05

        0.05

        -

        -

        試劑一(μL)

        35

        35

        -

        -

        振蕩,用試劑一將土樣浸濕(潮濕狀態(tài)即可),室溫放置15min

        -

        -

        試劑二(μL)

        835

        -

        -

        -

        混勻,37℃水浴/恒溫培養(yǎng)24h,沸水浴10min

        -

        -

        試劑二(μL)

        -

        835

        -

        -

        10000g,25℃離心5min,取上清

        -

        -

        標準液(μL)

        -

        -

        500

        -

        蒸餾水(μL)

        -

        -

        -

        500

        上清液(μL)

        500

        500

        -

        -

        工作液(μL)

        500

        500

        500

        500

         

        常溫靜置15min,于700nm處測定吸光值,分別記為A測定、A對照、A標準、A空白。分別計算 ΔA測定=A測定-A對照,ΔA標準=A標準-A空白(標準曲線和空白管只需做 1-2 次,每個測定管需設置一個對照管)。

        三、土壤植酸酶活性的計算

        1. 標準曲線的繪制

        根據(jù)標準管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標準(yΔA標準),建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,將ΔA測定(y,ΔA測定)代入公式計算樣本濃度(x,μmol/mL)。

        2. 土壤植酸酶活性計算

        單位定義:37g土壤每天在反應體系釋放1μmol無機磷為1個酶活力單位。

        土壤植酸酶活性(U/g= x×V反總÷W÷T=0.87x÷W

        V反:反應體系總體積,0.87mL;W:土壤質(zhì)量,g;T:反應時間,24h=1d。

        注意事項:

        1. 為防止沸水浴10min過程中水分散失,建議使用螺旋蓋的離心管或用封口膜給EP管纏口。

        2. 如果ΔA測定< 0.01,適當延長第一步37℃反應時間或加大樣本量后,重新測定。如果ΔA測定>1.2,建議將上清液用蒸餾水適當稀釋后進行測定,注意乘以稀釋倍數(shù)。

        3. 結果于30min內(nèi)測定完畢,盡量保證所有樣本測定時間的一致性。

        實驗實例:

        1. 0.05g林土,按照測定步驟操作,在玻璃比色皿中測得A測定 = 1.187,A對照 = 0.776?A測定= 0.411,將?A測定代入標曲公式y = 1.7046x + 0.0063,得出x= 0.2374,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        土壤植酸酶活性(U/g= 4.13U/g

        2. 0.05g蘑菇地土壤,按照測定步驟操作,測得A測定 = 0.756,A對照 = 0.577?A測定= 0.179,將?A測定代入標曲公式y = 1.7046x + 0.0063,得出x= 0.1013,按樣本質(zhì)量計算酶活得:

        土壤植酸酶活性(U/g= 1.763 U/g

        參考文獻:

        [1]  Berry D F, Shang C, Zelazny L W. Measurement of phytase activity in soil using a chromophoric tethered phytic acid probe[J]. Soil Biology & Biochemistry, 2009, 41(2):192-200.

        [2]  Marshall, Arebojie, Azeke, et al. Effect of germination on the phytase activity, phytate and total phosphorus contents of rice (Oryza sativa), maize (Zea mays), millet (Panicum miliaceum), sorghum (Sorghum bicolor) and wheat (Triticum aestivum) [J]. Journal of Food Science&Technology, 2011, 48(6):724-729.

        相關系列產(chǎn)品:

        BC0140/BC0145  土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性檢測試劑盒

        BC0460/BC0465  土壤中性磷酸酶(S-NP)活性檢測試劑盒

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        BC0270/BC0275  土壤中性*白酶活性檢測試劑盒

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         土壤植酸酶活性檢測試劑盒

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