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        • 土壤植酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        產(chǎn)品名稱:

        土壤植酸酶活性檢測試劑盒 微量法

        產(chǎn)品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價(jià)格:
        廠商性質(zhì): 生產(chǎn)廠家 產(chǎn)品時(shí)間: 2024-04-19
        土壤植酸酶活性檢測試劑盒 微量法
        儲(chǔ)存條件
        2-8℃
        有效期
        6個(gè)月
        單位

        英文名稱
        Sialic Acid Content Assay Kit
        檢測方法
        微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
        規(guī)格
        100T/48S
        自備試劑
        該試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

        產(chǎn)品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號(hào)BC5375
        規(guī)格100T/48S供貨周期現(xiàn)貨
        主要用途土壤植酸酶活性檢測應(yīng)用領(lǐng)域環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,綜合

        土壤植酸酶活性檢測試劑盒說明書

        微量法

        注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。

        貨號(hào):BC5375

        規(guī)格:100T/48S

        產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        試劑一

        液體3mL×1瓶(自備)

        2-8℃保存

        試劑二A

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑二B

        液體60mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        標(biāo)準(zhǔn)品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1. 試劑一:甲苯,需自備。

        2. 試劑二:臨用前將試劑二B全部倒入試劑二A中,充分震蕩溶解,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        3. 試劑三:臨用前加入3mL蒸餾水充分溶解,再將槍頭伸入液面下緩慢加入0.81mL濃硫酸,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        4. 試劑四:臨用前加入13mL蒸餾水充分溶解,再加入20μL濃硫酸,用不完的試劑2-8℃可保存4周。

        5. 工作液:臨用前根據(jù)測定數(shù)量將試劑三:試劑四=1mL5mL(約60T,可根據(jù)樣本量按比例調(diào)整)的比例混勻,配制后于2-8℃可保存3天。

        6. 標(biāo)準(zhǔn)品:10μmol/mL無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液。

        產(chǎn)品說明:

        植酸酶(Phytase)又叫肌醇六磷酸酶,是一種蛋白質(zhì)和糖的結(jié)合酶,植酸酶可以分解植酸產(chǎn)生無機(jī)磷和肌醇,極大的提高生物對(duì)養(yǎng)分的利用率。土壤植酸酶主要來自于土壤中的微生物,在磷素循環(huán)中起著重要作用,土壤植酸酶在土壤改良和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展領(lǐng)域具有較強(qiáng)的應(yīng)用前景。

        在一定的環(huán)境條件下,土壤植酸酶可以分解植酸鈉(肌醇六磷酸十二鈉)產(chǎn)生無機(jī)磷和肌醇衍生物,在酸性條件下,無機(jī)磷和鉬酸銨顯色劑發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)色的鉬藍(lán)物質(zhì),其在700nm有特征吸收峰,通過測定無機(jī)磷的含量,可計(jì)算出土壤植酸酶的活性。

         

        注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。

         

        需自備的儀器和用品:

        酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器研缽、30-50目篩、甲苯、濃硫酸、96孔板/微量玻璃比色皿、冰和蒸餾水。

        操作步驟:

        一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

        新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干,過 30~50 目篩。

        二、測定步驟

        1、酶標(biāo)儀/可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至700nm??梢姺止夤舛扔?jì)用蒸餾水調(diào)零。

        2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:將10μmol/mL無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋至1.25、0.625、0.3125、0.156250.078125、0.039、0.020.01μmol/mL備用。

        3標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋可參考下表

        序號(hào)

        稀釋前濃度(μmol/mL

        標(biāo)準(zhǔn)液體積(µL

        蒸餾水體積(µL

        稀釋后濃度(μmol/mL

        1

        10

        100

        700

        1.25

        2

        1.25

        200

        200

        0.625

        3

        0.625

        200

        200

        0.3125

        4

        0.3125

        200

        200

        0.15625

        5

        0.15625

        200

        200

        0.078125

        6

        0.078125

        200

        200

        0.039

        7

        0.039

        200

        200

        0.02

        8

        0.02

        200

        200

        0.01

        備注:實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。

        4、在離心管中按下表步驟加樣:

        試劑名稱

        測定管

        對(duì)照管

        標(biāo)準(zhǔn)管

        空白管

        土樣(g)

        0.03

        0.03

        -

        -

        試劑一(μL)

        20

        20

        -

        -

        振蕩,用試劑一將土樣浸濕(潮濕狀態(tài)即可),室溫放置15min

        -

        -

        試劑二(μL)

        500

        -

        -

        -

        混勻,37℃水浴/恒溫培養(yǎng)24h,沸水浴10min

        -

        -

        試劑二(μL)

        -

        500

        -

        -

        10000g25℃離心5min,取上清,以下步驟可直接加在96孔板或微量玻璃比色皿中。

        -

        -

        標(biāo)準(zhǔn)液(μL)

        -

        -

        100

        -

        蒸餾水(μL)

        -

        -

        -

        100

        上清液(μL)

        100

        100

        -

        -

        工作液(μL)

        100

        100

        100

        100

             室溫靜置15min,于700nm處測定吸光值,分別記為A測定、A對(duì)照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。分別計(jì)算 ΔA測定=A測定-A對(duì)照,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白(標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做 1-2 次,每個(gè)測定管需設(shè)置一個(gè)對(duì)照管)。

         

        三、土壤植酸酶活性的計(jì)算

        1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)(y,ΔA標(biāo)準(zhǔn)),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,將ΔA測定(yΔA測定)代入公式計(jì)算樣本濃度(x,μmol/mL)。

        2. 土壤植酸酶活性計(jì)算

        單位定義:37g土壤每天在反應(yīng)體系釋放1μmol無機(jī)磷為1個(gè)酶活力單位。

        土壤植酸酶活性(U/g= x×V反總÷W÷T=0.52x÷W

        V反:反應(yīng)體系總體積,0.52mL;W:土壤質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間,24h=1d

        注意事項(xiàng):

        1. 為防止沸水浴10min過程中水分散失,建議使用螺旋蓋的離心管或用封口膜給EP管纏口。

        2. 如果ΔA測定< 0.01,適當(dāng)延長第一步37℃反應(yīng)時(shí)間或加大樣本量后,重新測定。如果ΔA測定>1.2,建議將上清液用蒸餾水適當(dāng)稀釋后進(jìn)行測定,注意乘以稀釋倍數(shù)。

        3. 結(jié)果于30min內(nèi)測定完畢,盡量保證所有樣本測定時(shí)間的一致性。

        實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

        1.   0.03g三葉草土壤,按照測定步驟操作,在96孔板中測得A測定 = 0.359,A對(duì)照 = 0.28,?A測定= 0.079,將?A代入標(biāo)曲公式y = 1.1104x + 0.0077,得出x= 0.0642,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        土壤植酸酶活性(U/g= 1.113 U/g。

        2.   0.03g蘑菇土土壤,按照測定步驟操作,在96孔板中測得A測定 = 0.442,A對(duì)照 = 0.32,?A測定= 0.122,將?A代入標(biāo)曲公式y = 1.1104x + 0.0077,得出x= 0.1029,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

        土壤植酸酶活性(U/g= 1.784 U/g。

        參考文獻(xiàn):

        [1] Berry D F, Shang C, Zelazny L W. Measurement of phytase activity in soil using a chromophoric tethered phytic acid probe[J]. Soil Biology & Biochemistry, 2009, 41(2):192-200.

        [2] Marshall, Arebojie, Azeke, et al. Effect of germination on the phytase activity, phytate and total phosphorus contents of rice (Oryza sativa), maize (Zea mays), millet (Panicum miliaceum), sorghum (Sorghum bicolor) and wheat (Triticum aestivum) [J]. Journal of Food Science & Technology, 2011, 48(6):724-729.

        相關(guān)系列產(chǎn)品:

        BC0140/BC0145  土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性檢測試劑盒

        BC0460/BC0465  土壤中性磷酸酶(S-NP)活性檢測試劑盒

        BC0280/BC0285  土壤堿性磷酸酶(S-AKP/ALP)活性檢測試劑盒

        BC0270/BC0275  土壤中性蛋*酶活性檢測試劑盒

        BC0390/BC0395  土壤脫氫酶(S-DHA)活性檢測試劑盒

        土壤植酸酶活性檢測試劑盒 微量法 土壤植酸酶活性檢測試劑盒 微量法

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