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        • 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶
        產品名稱:

        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶

        產品品牌: SOLARBIO/索萊寶 價格:
        廠商性質: 生產廠家 產品時間: 2024-04-19
        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶
        儲存條件
        -20℃
        有效期
        6個月
        單位

        英文名稱
        Fluoride Resistant Acid Phosphatase Activity Assay Kit
        檢測方法
        可見分光光度法 Spectrophotometer
        規(guī)格
        50T/24S

        產品概述

        品牌SOLARBIO/索萊寶CAS詳詢
        分子式詳詢純度詳詢
        分子量詳詢貨號BC5450
        規(guī)格50T/24S供貨周期現貨
        主要用途抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測應用領域環(huán)保,化工,生物產業(yè),農林牧漁,綜合

        抗氟離子酸性磷酸酶(FRAP)活性檢測試劑盒說明書

        可見分光光度法

        貨號:BC5450

        規(guī)格:50T/24S

        產品內容:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

        試劑名稱

        規(guī)格

        保存條件

        提取液

        液體30 mL×1

        2-8℃保存

        試劑一

        液體4mL×1

        2-8℃保存

        試劑二

        液體3.6mL×1

        2-8℃保存

        試劑三

        粉劑×1

        -20℃保存

        試劑四

        粉劑×1

        2-8℃保存

        試劑五

        液體0.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑六

        液體3.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑七

        液體3.5mL×1

        2-8℃保存

        試劑八

        液體40mL×1

        2-8℃保存

        標準品

        液體1mL×1

        2-8℃保存

        溶液的配制:

        1、 試劑三:臨用前加入3.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑-20℃保存可以保存4周,避免反復凍融。

        2、 試劑四:臨用前加入5.5mL蒸餾水,充分溶解,未用完的試劑2-8℃保存可以保存4。

        3、 試劑五:臨用前根據樣本數量按照試劑五:蒸餾水=1:9的比例配制,現用現配。

        4、 標準品:5μmol/mL 酚標準液。臨用前取100μL5μmol/mL 酚標準液EP管中,加入700μL蒸餾水充分混合,配0.625 μmol/mL酚標準液。

        產品說明:

        抗氟離子酸性磷酸酶(fluoride resistant acid phosphatase, FRAP)是酸性磷酸酶的一種??狗x子酸性磷酸酶主要分布于在絕大多數細胞的溶酶體中、前列腺(prostate gland)、腦、肝臟、脾臟和血小板。

        抗氟離子酸性磷酸酶的活性不被氟離子抑制,而其他的酸性磷酸酶的活性則會受到氟離子的抑制。酸性條件下,抗氟離子酸性磷酸酶催化PN PP生成對硝基 苯*。對硝基 苯*在堿性條件下呈黃色,可以在400nm波長下檢測吸光度。產物黃色越深,說明抗氟離子酸性磷酸酶活性越高,反之則酶活性越低。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調式移液器、1mL玻璃比色皿研缽/勻漿器/超聲破碎儀、蒸餾水和冰。

        操作步驟:

        一、 樣本處理(可適當調整待測樣本量,具體比例可以參考文獻)

         

        1、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        2、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

        3、液體:直接測定。(若溶液呈現渾濁,則離心取上清后再測定)

        二、測定步驟

        1、 可見分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至400nm,用蒸餾水調零。

        2、操作表:

        試劑名稱(μL

        測定管

        對照管

        標準管

        標準空白管

        樣本

        50

        50

        -

        -

        標準品

        -

        -

        50

        -

        蒸餾水

        -

        50

        -

        50

        試劑一

        50

        50

        50

        50

        試劑二

        50

        50

        50

        50

        試劑三

        50

        -

        50

        50

        試劑四

        50

        50

        50

        50

        試劑五

        50

        50

        50

        50

        試劑六

        50

        50

        50

        50

        試劑七

        50

        50

        50

        50


        37℃避光反應30min

        -

        -

        試劑八

        600

        600

        600

        600

        混勻后測定在400nm處的吸光度,記作A測定,A對照,A標準,A標準空白。?A測定=A測定-A對照,?A標準=A標準-A標準空白。(標準管和標準空白管只需做1-2次。)

        三、FRAP活性計算

        (1) 按樣本蛋白濃度計算

        單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

        FRAP活性(U/mg prot=(?A測定×C標準÷?A標準) ×V÷Cpr×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標準÷Cpr×F

        (2) 按樣本質量計算

        單位的定義:每g組織每分鐘催化產生1nmol酚定義為一個酶活力單位。

        FRAP活性(U/g 質量)= (?A測定×C標準÷?A標準) ×V÷W÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標準÷W×F

        (3) 按細菌或細胞數目計算

        單位的定義:每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol義為一個酶活力單位。

        FRAP活性(U/104 cell= (?A測定×C標準÷?A標準) ×V÷N÷V樣總×V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標準×F

        (4) 按血清(漿)等液體體積計算

        單位的定義:每mL血清(漿)等液體每分鐘催化產生1nmol義為一個酶活力單位。

        FRAP活性(U/mL= (?A測定×C標準÷?A標準) ×V÷V÷T×103×F=20.83×?A測定÷?A標準×F

         

        C標準酚標準液,0.625 μmol/mL;V:反應體系中加入的樣本體積,0.05mL;V樣總:加入的提取液體積,1mL;T:反應時間,30min;Cpr:蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g;N:細胞或細菌數目,以萬計 ;103:單位換算系數,1μmol/mL=103nmol/mL;F:樣本稀釋倍數。

        注意事項:

        1、 如果測定吸光值或?A測定大于1.2,可以對樣本進行稀釋或者縮短37℃酶促反應時間;測定吸光值或?A測定小于0.01,可以加大樣本量或者延長37℃酶促反應時間。最終計算時同步修改計算公式。

        實驗實例:

        1、 稱取0.1074g兔子肝臟組織,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,將上清液稀釋2倍后按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?A測定=A測定-A對照=0.685-0.018=0.667,?A標準=A標準-A標準空白=0.582-0.031=0.551 ,帶入公式計算:

        FRAP活性(U/g 質量)= 20.83×?A測定÷?A標準÷W×F =469.558 U/g 質量

        2、 稱取0.1057g竹子葉,加入1mL提取液進行冰浴勻漿,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?測定=A測定-A對照=0.445-0.148=0.297,?標準=A標準-A標準空白=0.582-0.031=0.551,帶入公式計算:

        FRAP活性(U/g 質量)= 20.83×?A測定÷?A標準÷W×F =106.223U/g 質量

        3、 吸取0.05mL羊血清,按照測定步驟操作,用1mL玻璃比色皿測得計算?測定=A測定-A對照=0.084-0.028=0.056?標準=A標準-A標準空白=0.582-0.031=0.551,帶入公式計算: 

        FRAP活性(U/mL= 20.83×?A測定÷?A標準×F =2.117 U/mL 

        參考文獻:

        [1] Megat R, Wahab A, Dasor M M , et al. Crevicular tartrate resistant acid phosphatase activity and rate of tooth movement under different continuous force applications[J]. African journal of pharmacy and pharmacology, 2011, 5(20):2213-2219. 

        [2] Natasˇa Mitic′, Mohsen Valizadeh, Eleanor W.W. Leung, et al. Human tartrate-resistant acid phosphatase becomes

        an effective ATPase upon proteolytic activation [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics 439 (2005) 154–164.

        相關系列產品:

        BC2140/BC2145 組織及血液堿性磷酸酶AKP/ALP活性檢測試劑盒

        BC2130/BC2135 組織及血液酸性磷酸酶ACP活性檢測試劑盒

        BC5400/BC5405 抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性檢測試劑盒

         

        抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶 抗氟離子酸性磷酸酶活性檢測試劑盒 酯酶

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